实验一还原糖、肪、蛋白质、DNARNA鉴定.pptVIP

实验一 生物组中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质、DNA、RNA的鉴定 * * * * 教学目标： 知识目标：阐明实验原理—颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。 能力目标：培养学生主动获取知识，应用知识分析现象，归纳总结的能力，培养学生实际操作的能力及从现象出发探求事物本质的能力。 情感与价值目标：通过亲手实验体验科学家严谨治学的科学态度，培养实事求是的世界观。 一、实验原理 1.可溶性还原糖 生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的本尼迪特试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖及不能溶解的糖。葡萄糖溶液在加入本尼迪特试剂，在加热条件下被还原为红黄色的Cu2O沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反应式为: -CHO+Cu(OH)2 -COOH+Cu2O↓红黄色 2.脂肪的鉴定 苏丹Ⅲ(苏丹Ⅳ)为一种脂肪染色剂(易溶解于酒精，不溶解于水)。苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。其反应式为: 脂肪 苏丹Ⅲ （苏丹Ⅳ） 橙黄色（红色） 3.蛋白质的鉴定 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。反应式为: 双缩脲在碱性环境中能和硫酸铜结合成红紫色的络化物。蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相似，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应： -CO – NH -（类似双缩尿H2NOC - NH - CONH2结构）碱性条件下与Cu2+作用形成紫色络合物——双缩尿反应 选材：含糖量较高的白色或近于白色，苹果、梨最好 。 二、实验步骤与现象 1.可溶性还原糖 制备组织样液： 制浆：去皮、切块、研磨 过滤：（用单层纱布） 取液：（２mL） 显色反应 现象： 2.脂肪的鉴定 取材：花生种子（浸泡３~４h），去皮，将子叶削成薄片 制片： 选取最薄的薄片移至载玻片中央 在薄片上滴加苏丹Ⅲ 染液2~3滴，染色２~３min 滴加体积分数为50%的酒精溶液1—2滴，洗去浮色 吸去余液，滴1-2滴蒸馏水，盖上盖玻片 观察： 先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察 结果： 有被染成橙黄色的脂肪微粒 3.蛋白质的鉴定 选材与制备 组织样液： 黄豆组织样液（或鸡蛋白稀释液） ［黄豆浸泡 →去皮→切片→研磨→过滤→滤液］ 显色反应 现象： 无色 紫色或紫红色 4.观察DNA和RNA在细胞中的分布 实验原理 DNA主要分布在细胞核内，RNA大部分存在于细胞质中。核酸均为酸性，对碱性染料甲基绿和吡罗红具有亲和力，这两种染料对DNA和RNA的亲和力不同。用这两种染料混合液处理细胞时，由于DNA和RNA聚合程度不同，甲基绿分子有两个相对的正电荷，与聚合程度较高的DNA分子有较强的亲和力，可使DNA分子染成绿色，而吡罗红分子中仅一个正电荷，可与聚合程度较低RNA结合使其染成红色。即RNA对吡罗红亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成蓝绿色。吡罗红甲基绿染液可显示细胞中DNA、RNA的分布。 三、实验成功的关键与注意事项： 1.实验成功的关键在于实验材料的选择： ⑴．在做可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官)，而且组织的颜色较浅，最好是白色或近于白色的植物组织，这样可以避免材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 ⑵．在做脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功，要求实验技能较高，不妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。 ⑶．在做蛋白质的实验时，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋，鉴定之前需要留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色做比较，这样可增强说服力。 (1)斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1g/mL的NaOH溶液)和乙液(0.05g/mL的CuSO４溶液)分别配制、储存，使用时，再临时配制，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。 (2) 鉴定可溶性还原糖，加热试管时，应该用试管夹夹住试管上部，放入盛开水的大烧杯加热；注意试管底部不接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以