实验七 人类性色质（Barr氏小体和Y小体）标本制备与观察.pptVIP

* * 实验七 人类性染色质(Barr氏小体和Y小体)标本制备与观察 （教材P47-49实验11,有改动，并增Y小体检测） 一、实验目的： 1.掌握哺乳动物性染色质检测方法； 2.掌握X染色质失活机制及其意义。 　　 1 X染色质： 二、实验原理： 1.剂量补偿观点的提出： Muller（1932）：剂量补偿（Dosage compensation）观点——可能存在着一种维持雌、雄两性生物基因表达一致的遗传机制。 2. X小体的发现（1949，M.L.Barr等）： 雌猫神经细胞核膜边缘深染的小体 见于人类女性口腔上皮细胞（大小1~1.5μm） Barr小体为Δ形/Ο形，数目=X染色体数目-1 间期失活的异固缩状态的X染色体 ⑴ 正常雌性个体，两条X染色体中有一条是失活的； ⑵ 失活是随机的 ⑶ 失活出现在胚胎早期，且总是这条X染色体失活。 （4）杂合雌体在伴性基因作用上为嵌合体 3. Lyon假说 是否所有组织、全部细胞、任何时间都存在这种X小体； 失活的X小体是如何复制…… 5. 应用 遗传 临床 法医诊断 4. 疑问： 不同性染色体组成的人的X小体 另外: Y小体（Pearson,1970） 男性细胞核内近中央， 直径0.25-0.3μm Ο形 为Y染色体长臂远端异染色质 示意图 应用 遗传 性别鉴定 Y染色体异常检查 三、实验步骤 人体毛囊细胞性染色质的标本制备 X小体和Y小体分析各用女、男材料（至少各两根） ①取材（女、男） 拔取带毛囊头发→45%醋酸解析5min → 吸掉余酸→印染转移（教材p48）或以镊子轻轻刮涂毛囊于载玻片? A、用于X小体的材料（女，男的做对照） 染色-观察：改良品红，2-3min→盖片→压片→LM镜检。 1．毛球，2.内层毛囊， 3.外层毛 ②X、Y小体实验平行做 B、用于Y小体的材料（男，女的做对照） 固定：乙醇-乙醚1:1，20-30min（可达12h）→95%乙醇 30min → 晾干。（周二两组上课时间做到此暂停） 染色：Macllvaine’s缓冲液pH6，5min → 0.2%二盐酸喹吖 因，10min → 换新Macllvaine’s缓冲液pH6，5min×2 （分色） → 盖盖玻片、暗处平放 ·周一、四、五组上课时到此暂停 ·周二上午组晚上9点染色、下午组晚上9点半染色 观察：染色12-17h内，荧光显微镜观察 周一组周二上午8-10点观察 周二上午组周三下午1点、下午组周三下午3点观察 周四组周五上午10点观察 周五组周六上午9点观察 *