IL101857PE40高效表达纯化及细胞活性之分析.pdf

卷 期 生 物 工 程 学 报 !! %’ (!! ) ( 年 月 !##$ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *+,-+./ !##$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !#$%$#’( #)*+% 高效表达、纯化及细胞活性之研究 ， ,-./ 0102 *345066-78 )95-:-;=-78 8 ?@=7=73-;-=@ 7: !#$%$#’( #)*+% ! E 彭其胜 ，李月红 ，朱 平 ! E ， KH)L M3D6B1,A NO P-1DQ,A +,5 RQS K3,A 吉林大学畜牧兽医学院，长春 E##$! ! 吉林农业大学动物科技学院长春 E#; E 军事医学科学院军事兽医研究所，长春 E##$! ， ， ， !(,,%1% (- 3%/%*#$+*2 ’#,#$ 4$#5%*#/2 !+$10)$ E##$! !#$+ ， ， ， ! 6$#7+, 80#%$0% +$9 :%0$(,(12 !(,,%1% ’#,#$ 61*#0),/)*+, 4$#5%*#/2 !+$10)$ E#; !#$+ ， ， ， E ;$/#/)/% (- 3%/%*#$+*2 80#%$0% 60+9%72 (- #,#/+*2 %9#0+, 80#%$0% !+$10)$ E##$! !#$+ 摘 要 以 的功能短肽（ 肽，即 第 号至 号氨基酸）为导向部分与 （绿脓杆菌外毒素除去受体结合区后 OND# # OND# ; F KH# 的剩余部分）融合分别构建了 的胞质和胞周质表达质粒，其中， 在 （ ）中以高效胞质 OND#;DF DKH# OND#;DF DKH# 0@188+:’-1 THE 可溶形式表达，在 （ ） 中以胞周质分泌形式表达；表达宿主菌 （ ）超声波破碎后，依次通过硫酸铵盐 UN! THE 7N/@6 0@188+:’-1 THE 析、疏水层析、铜离子亲和层析、阴离子交换层析纯化后，得G$ V 重组毒素纯品；细胞活性实验、细胞HNO6= 和荧光标记实验表 明，构建的 符合免疫毒素的作用机理。因此，该实验为 免疫毒素的规模制备和纯化做了一定的有益的探索。 OND#;DF DKH# KH 关键词 OND#;DF DKH#，纯化，细胞毒性 中图分类号 ；