免疫亲和柱一高效液相色谱法检测红曲米中的桔霉素1柏I塑！塑.PDF

免疫亲和柱一高效液相色谱法检测红曲米中的桔霉素。 郭雪梅，许杨，刘仁荣 (南昌大学中德联合研究院．教育部食品科学国家重点实验室。江西南昌。330047) 摘要制备抗桔霉素(cjt一而n，cIT)单克隆杭律免疫亲和柱(1Ac)，建立了检潮红曲束中cIT的免疫素和柱一 高效藏相色谱植测方法。呆用甲肆一未提取红曲朱样品，特提取灌用PBs稀释后过免疫掌和柱，甲醇冼脱后以高 鼓寝相色谱法检测，激发渡长为33l啪，发射波长为500nm，流动相采用乙腑一磷酸溶液(体积比为45·55， 隆抗体，柱客量为o．35雠。红曲来样品霹加CIT标品o．1～o．6mg／kg，平均回收宰为74．2％～87．¨％，相对 标准偏差为2．85％～13．12％。最低挂出服为O．1 nlg／kg(s／N一3)． 美键词 桔霉素(cIT)．免疫亲和桂．高效液相色谱，红曲米 桔霉素(CIT)是由真菌产生的次级代谢产物，是 一种真菌毒素，其主要作用的靶器官是肾脏，也称为 8．Og，KH2PO‘0．2 2．9g， g，Na2HP04·12H20 000 肾毒素，同时，桔霉素还有致畸性。主要污染红曲类 Kcl0．2 mL)。 g，NaN；O．29，加蒸馏水定容至l 产品、玉米、大米、奶酪等，对人和动物的健康危害较 3 实验方法 大。纯品桔霉索为黄色，无味，酸性，针状棱形晶体， 其分子式为C．，H．．O。，相对分子质量为250．25，化学3．1 HPLC法 命名为(3R，4s)一4，6一二氢一8一羟基一3，4，5一三甲基一6一 氧一3H一2一苯吡一7一羧酸。桔霉素不溶解于水，完全溶解 Ext叽d—C…4．6×150 mm，5弘m)；进样量：10pL， 于甲醇、乙腈、乙醇、丙酮、苯、cHcl。等有机溶剂 nm，Em=500 流速1mL／min}荧光检测：Ex=331 中o]。研究中将纯化好的抗桔霉素单克隆抗体与溴 l nm；流动相；y(乙腈)：y(水)=4555，磷酸调pH 化氢活化的载体偶联。采用紫外扫描鉴定偶联反应， 值至2．O。 高效液相色谱法对制备好的IAC进行评价，并使用 桔霉素HPLC检测方法的标准曲线的绘制：10 该IAc对市售的16份红曲米样品进行了检测。 pL不同浓度的cIT标品溶液(1～250ng／mL，溶于 1仪器 甲醇)用HPLC检测，重复进样3次，绘制标准曲线。 3．Z抗CIT单克隆抗体的纯化01 D一37520离心机(Thermo，Germany)，Lambda 采用辛酸一硫酸铵法纯化含抗cIT单克隆抗体 EImer)，MK3酶标仪 35紫外分光光度计(Perkin 的小鼠腹水。 (Therm