实验网织红细胞计数血沉测定.ppt

实验三 网织红细胞计数、血沉测定及白细胞计数 一、网织红细胞计数 目的 掌握网织红细胞（Ret)试管法计数的原理及操作方法。 原理 网织红细胞胞质内残存少量核蛋白体及核糖核酸等嗜碱性物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后，呈蓝色网状或点状结构，可与成熟红细胞相区别。 器材 显微镜、试管、吸管、玻片、推片、香柏油、擦镜纸、擦镜液 试剂 新亚甲蓝 标本 新鲜全血 操作步骤 1.加染液 将Ret染液2滴加至小试管中，做好标记。 2.加血 在已加入染液的小试管内注入新鲜全血2滴，立即混匀。 3.染色 室温下染色10-15min。 4.涂片制备 取染色血1小滴推制成薄血涂片，自然干燥 5.观察 低倍镜下选择红细胞分布均匀、着色好、背景清晰的部位进行计数。 6.计数 常规法：在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞。 7.计算 Ret百分数=（1000个RBC中的Ret数/1000）×100% 8.结果报告 网织红细胞百分数：X.X% 血涂片制备 推片 载玻片 血液 将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度。 一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾 涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号 李四 B 1 2 3 参考区间 成人、儿童：0.5%-1.5% 新 生 儿：2.0%-6.0% 注意事项 1.试剂准备 推荐使用新亚甲蓝染液，试剂应定期配制，用前过滤。 2.染色 染液与血液比以1:1为宜,染色时间不能过短。试剂用后及时盖好盖子，以免挥发。 3.标本 应及时染色，及时测定。 4.计数 选择红细胞分布均匀，网织红细胞着色好的、背景清晰的部位计数。应兼顾血片边缘和尾部。 目的 掌握魏氏法测定血沉的原理及方法。 原理 将一定量的枸橼酸钠抗凝全血置于魏氏血沉管中，直立于血沉架上，由于红细胞比重大于血浆，克服血浆阻力而下沉，1h后读取上层血浆高度的毫米数，即为红细胞沉降率。 器材 魏氏管、血沉架、洗耳球。（血沉管） 试剂 109mmol/L枸橼酸钠溶液。 标本 外周血。 二、血液沉降率测定（魏氏法） 1.采血 采静脉血1.6ml加入含0.4ml 109mmol/L枸橼酸钠溶液抗凝剂的采血管中（即采血量到采血管2ml刻度线处） ，混匀。 2.吸血 混匀血吸入血沉管内至刻度“0”处，拭去管外残余血。 3.立血沉管 将血沉管直立于血沉架上。 4.读数 1h末准确读取红细胞下沉后露出的血浆高度。 5.报告方式 XX mm/h 操作步骤 参考值 ＜50岁：男性 15mm/h 女性 20mm/h ＞50岁：男性 20mm/h 女性 30mm/h ＞85岁：男性 30mm/h 女性 42mm/h 儿童: 10mm/h 二、血液沉降率测定（魏氏法） 注意事项 1.严格控制采血量，使抗凝剂与血液比例为1：4。 2.血沉管应垂直放置，不得倾斜。 3.测量时，血沉架应避免直接光照、移动和振动。 4.本实验最适宜温度为18～25℃，并要求在采血后 2h内完成。 5.红细胞沉降率在1h沉降过程中，并不是均衡等速度的沉降，绝不可以只观察30min沉降率，将结果乘以2作为1h血沉结果。 二、血液沉降率测定（自动血沉仪法） 白细胞计数 一、目的 掌握显微镜白细胞计数的方法。 二、原理 用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液冲入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数。 三、器材 显微镜、改良计数板、血盖片、试管、微量 吸管、加样枪、乳胶吸头、纱布 四、试剂 白细胞稀释液 五、标本 EDTA盐抗凝血