课件：酶组织化学总论.ppt

常用四唑盐种类 三苯四唑氯化物 TTC 蓝四唑盐 BT 新四唑盐 NT 四唑氮蓝 NBT 四氮四唑盐氯化物 TNBT (五) 靛蓝反应 原理: 底物被酶分解为二个初级反应产物, 其中之一可在一定条件下形成不溶性的靛蓝 应用: 可显示胆碱酯酶、磷酸酶、糖苷酶、非特异性酯酶 例如： 吲哚酚酯 吲哚酚+ RCOOH 吲哚酚 靛蓝（兰色沉淀） 酯酶+水 氧化作用 O2 四. 酶组织化学的应用 了解组织、细胞的代谢活动 细胞类型的判断 了解细胞定位 用于肿瘤的研究 用于免疫组化和杂交组化的显示手段 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * Enzyme histochemistry 一. 概述 酶是生物体内具有催化作用的特殊蛋白质 高效性 103-106倍 专一性 低反应条件 易变性失活 降低生化反应的反应活化能 酶活性的检测方法 广义上说，任何一种可以测定反应物变化速度的分析技术，都可用来测定酶活性 容量法（量气法） 比色法与分光光度法 荧光法与同位素法 离子选择电极法，旋光法 分子生物学，免疫化学法等 酶的组织化学 利用细胞内的酶具有催化底物的特性，并通过显色反应在切片或涂片上显示组织或细胞中内源性酶的活性及其定位的方法 酶组织化学发展历史 1868年 Klebs 组化 1939年 Takamatsu、Gomori 碱性磷酸酶 1940-1960年 电镜酶组织化学 1955年 Scheldon 酸性磷酸酶 免疫酶组织化学 1970年 Sternberger 酶标抗体法 目前，用酶组织化学方法能显示的酶已达100余种 酶的种类 1. 氧化还原酶 2. 转移酶 3. 水解酶 4. 裂解酶 5. 异构酶 6. 合成酶 二. 酶组织化学反应的基本知识 酶的特性 酶的定位 酶组织化学的基本原理 （一）酶的特性 水溶性，易扩散，难溶或不溶于有机溶剂 有机溶剂不同程度降低酶的活性 易受温度影响，对热耐受性弱 对干燥耐受性强 （二）酶的定位 酶在细胞内或超微结构中存在的特定部位 5‘-核苷酸酶——浆膜 ATPase——肌球蛋白 细胞膜 线粒体 (三）酶组化的基本条件 同时保存结构和酶的活性 保存酶的定位，防止酶的扩散或移位 保证反应产物的特异性 *影响酶活性的因素： 温度 PH值 抑制剂 激活剂 （四）原理及一般原则 1. 基本原理 细胞内的酶催化分解合适的底物，生成中间产物（即初级反应产物） 然后其中之一再与辅助物（或捕捉剂）反应，生成有色不溶性的终反应产物 该反应产物沉积在原位，以显示酶的存在 第一反应：酶促反应 底物 初级反应产物（PRP） 第二反应：捕捉反应 PRP + 捕捉剂 终反应产物（FRP） 酶 * PRP弥散： 1. 底物在酶催化下水解的速度 2. PRP在缓冲液中的弥散系数 3. PRP与辅助物反应的速度 应选择合适的底物和辅助物, 减少弥散 捕捉剂的浓度 （1mg/ml） 2. 一般原则 对组织处理, 制片过程不能影响酶的活性及分布 所选底物和辅助物必须迅速, 同步穿透入组织和细胞中 所选底物最好只能被一种酶催化分解 所选辅助物不影响细胞内酶的活性, 不影响其他反应试剂的穿透性 PRP必须迅速与辅助物反应, FRP为水不溶性的有色稳定产物 所有参与反应的试剂均不能与其他成分吸附或结合 (五) 酶组织化学的主要步骤 1. 酶的固定 （fixation） 2. 酶的特异性反应 （specific reaction） 3. 在最适条件下, 酶反应产物的沉着（precipitation） 4. 使沉着物具有可见性 （