课件：基因工程常用的工具酶.ppt

二、碱性磷酸酶 细菌碱性磷酸酶（BAP）：来自E.coli 小牛肠碱性磷酸酶（CIP）：来自小牛肠 作用：催化核酸分子脱去5’-P 5‘ p OH 3‘ DNA or RNA 5‘ ppp dNTP 5‘ pppNTP BAP / CIP OH 3‘ 5‘ HO 5‘ HO dNTP 5‘ HO NTP 用途： 防止载体自身环化 5‘端标记时去磷酸化 三、 T4-多核苷酸磷酸激酶（T4-PNP） 特性：催化γ-P从ATP分子转移给DNA/RNA的5’-OH端 作用：5’端同位素标记 5‘ HO 3‘ HO OH 3‘ OH 5‘ T4-PNP Mg2+ pppATP（g-32P-ATP） 5‘ p 3‘ HO OH 3‘ p 5‘ 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * 限制性核酸内切酶：简称限制酶。是一类能识别双链DNA分子中某种特定的核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶 20世纪50年代发现： λ噬菌体 E.coli B PFU10-4 E.coli B PFU1 λ噬菌体 DNA被降解 DNA被修饰 E.coli B 限制性核酸内切酶：降解外来DNA 防御 修饰酶：DNA甲基化 保护 寄主细胞控制的限制与修饰系统（R/M体系）！ 一、限制酶的种类 限制修饰活性 酶蛋白结构 相对分子质量 切割位点 切割作用辅助因子 实用性 代表 Ι型酶 Ⅱ型酶 Ⅲ型酶 同时存在 单独存在 同时存在 多亚基结构 单亚基结构 两个亚基 30万dal 2-10万dal Ι 、Ⅱ之间 与识别位点不一致 与识别位点一致 与识别位点不一致 Mg2+、ATP、SAM Mg2+ Mg2+、 SAM 低 高 低 EcoK、EcoB Hind Ⅱ EcoPΙ 二、限制酶的命名 命名原则 限制酶寄主微生物属名头字母（大写）和种名前两字母（小写）表示寄主物种 菌株名位于其后 罗马数字表示同一寄主菌株的不同限制修饰系统 Haemophilus influenzae d HindΙ、 HindⅡ、 Hind Ⅲ 属名 种名 株名 不同限制修饰系统 三、Ⅱ型限制酶的特性-识别序列 识别双链DNA分子中特定的4 - 8对核苷酸序列 5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’ EcoR I的识别序列 EcoR I的切割位点 5‘ … G A G G C C G A G … 3’ 3‘ … C T C C G G C T C … 5’ HaeⅢ的识别序列 HaeⅢ 的切割位点 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧 部分限制酶能识别多种核苷酸序列 5‘ … G C G T Py Pu A C G A G … 3’ 3‘ … C G C A Pu Py T G C T C … 5’ HindⅡ的识别序列 Py dCMP、dTMP Pu dAMP、dGMP 识别序列呈典型的旋转对称型回文结构 5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’ EcoR I的识别序列 EcoR I的切割位点 回文结构:两条核苷酸链的核酸序列呈双重旋转对称排列的 DNA双螺旋结构 三、Ⅱ型限制酶的特性-切割后形成的末端 粘性末端