课件：聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchang.ppt

电泳 1)加样完毕后，将电泳槽盖好盖，与电泳仪相连接。 2)电泳仪电压调至最大，电流调到最小，打开电泳仪开关进行恒流电泳。 3)浓缩胶:30mA(150V) 分离胶:40mA(200V) 加样后马上将微量加样器仔细冲洗多遍，以免血清堵塞针尖。 观察并记录电泳现象 剥胶：拆开电泳槽装置，用竹镊子轻轻撬开两层玻璃板，戴上一次性手套，用手和镊子将分离胶剥离到染色液盘内，染色15分钟。 脱色： 将分离胶小心完整地从染色液中移到脱色液内，脱色三次，每次10分钟（每次更换新鲜脱色液80-100ml），脱色时在摇床上摇。 八、剥胶、染色、脱色 点样线 ? ? ?2 ?1 清蛋白 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳示意图 — + 聚丙烯酰胺凝胶电泳血清蛋白质区带分布示意图 PAGE与醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质比较 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * 实验九：聚丙烯酰胺凝胶电泳法  分离血清蛋白质 教 师：王丽华 实验目的 1、熟悉电泳的基本原理 2、掌握PAGE的基本原理与操作技术 具体安排 上午:制胶、原理讲解 中午：电泳（午餐） 下午：染色，脱色、观察结果 电泳的基本原理 电泳： 是指带电粒子在电场中向着与其所带相反电荷的电极方向移动的现象。 应用: 蛋白质、核酸和氨基酸等物质的分离和鉴定。 带电粒子的运动速度迁移率μ 即带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。 μ = Q X /6πrη Q 粒子所带电荷量 X 电场强度 r 粒子半径 η 介质的粘度 影响电泳速度的因素 1、内在因素: 样品自身性质 2、外在因素: 电场 缓冲液 支持介质 a. 电荷 b. 分子大小 c. 形状 v=QX/6πrη 内因：待分离大分子的性质 电场（三要素） 电流： μ与电流成正比 电压： μ与电压成正比 常压电泳（100-500V） 高压电泳（500-10000V） 电阻： μ与电阻成反比 缓冲液 pH： 为电泳提供了恒定的pH值和适宜的离子强度 解离性质 解离程度 运动方向 电荷量 一般所用离子强度为0.02-0.2之间 离子强度： 强度过低，缓冲能力差，难以维持pH恒定，同 时样品扩散严重； 强度过高，减缓样品的迁移率。 支持介质（物） 吸附:支持介质对样品的滞留作用,可导致样品的拖尾。 电渗：在电场中液体对固体支持物的相对移动。 当电渗方向与电泳方向一致时，会加快颗粒泳动 速度；反之，当两者方向相反时，会减慢颗粒泳 动速度。 分子筛：是凝胶电泳的一个特性。筛孔越小，则颗粒在 移动的过程中所受到的阻力也就越大。 电泳分类 按支持介质的不同可分为 ⑴ 纸电泳 ⑵ 醋酸纤维薄膜电泳⑶ 琼脂糖凝胶电泳 ⑷ 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）⑸ SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 PAGE实验原理 N，N－甲叉双丙烯酰胺(Bis) 单体 交联剂 催化剂 加速剂 丙烯酰胺(Acr) 过硫酸铵/核黄素 N，N，N‘，N’－四甲基乙二胺（TEMED） 聚丙烯酰胺凝胶： 是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N，N，－甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂和加速剂的作用下聚合而成的三维网状结构的凝胶。 丙烯酰胺(Acr) N，N－甲叉双丙烯酰胺(Bis) 分类（根据有无浓缩效应） 连续电泳： 电泳体系中缓冲液组成、pH值及 凝胶孔径大小都相同。 电荷效应、分子筛效应 不连续电泳：电泳体系中缓冲液组成、pH值 及凝胶孔径大小都不相同。