课件：肉类食品中的抗生素及抗菌剂残留测定.ppt

* 大环内酯类抗生素是作为苷元的12或14环内脂上结合包括氨基糖在内的数个糖类而形成的化合物，是干扰革兰氏阳性菌、支原体等发育的抗生素。在此，对具有代表性的大环内脂类抗生素螺旋 霉素、夹竹桃霉素、脱氢红霉素、美地霉素进行同时分析。 因大环内脂类抗生素不具有特征性UV吸收，不加以修饰则难以进行高灵敏度分析。在 ．1的UV21 检测色谱图上，仅只可确认美地霉素的峰。 以正离子电喷雾法产生的多价离子反映出化合物的碱式官能团(此时为二甲基氨基)的数量。因此，可以得到螺旋霉素给出2价离子(M+2H)’’其他化合物给出1价离子离子(M+H)’这样简单的质谱图。 根据这些分子离子种类进行的选择离子检测(S1M)的分析结果如 上。LC— MS 的优点在于不仅可进行高灵敏度分析，而且，不受梯度洗脱造成的基线变动的影响，进一步还可对诸如螺旋霉素Ⅰ和Ⅱ这样完全重叠的成分或诸如脱氢红霉素和美地霉素这样峰分离不充分的成分，进行确认及 分别定量。 * 电喷雾法是软电离方式，因此，ESl质谱是只观察分子离子的单纯质谱。当进行色谱分析产生疑问：“这种副成分是什么?”时，MS检测便成为可靠的检测手段。在此，介绍使用单四极杆质谱仪获得碎片离子信息的技巧以及使用碰撞诱导解离法。对红霉素中所含副产物成分的鉴定。 * * 上图表示主成分成为红霉素的溶液的分析结果。因不具备强UV吸收，所以用UV检测器只可确认2个峰，但在TIC上则可确认3个峰。并且，如果使用质色谱法，则可对微量成分(峰1)和与大峰重叠溶出的成分(峰2)明确地进行确认。 这5种成分分别在M／Z 720、748、734、718、716上给出质子化分子，以此可确认它们的分子量分别为719、747、733、717、715。从与红霉素(峰3，分子量733)的质量差可推测峰l、2、3、4、5 分别为脱甲基、同型、脱氧、脱羟基体。 * 通过测定碰撞诱导解离(C工D)谱图，可以明确红霉素与这些副产物成分的差别o LCMS—QP8000通过改变偏转器电压，容易地测定CID谱图。上图表示红霉素的C工D谱图。将偏转器电压提高60V，可在M／Z 576及165上得到碎片离子。它们分别归属为非糖部分+氨基糖部分及氨基糖的离子型离子。进一步可从碎片离子的质量差得到非糖部分及中性糖的质量。利用以C1D条件测定的质谱图可鉴定出峰1、2是与红霉素比较，中性糖部分发生变化的化合物；峰4、5是非糖部分发生变化的化合物。 · * 所谓抗生素是由微生物制造出的化学物质，对其他微生物(成为感染症原因的微生物)产生作用，阻止其发育使之死灭的物质。最近，化学合成的物质也叫抗生素(也有叫抗菌药)o抗生物质一般具有选择毒性，只对特定的菌产生作用，比如，青霉素对动物不具备的、只有细菌才具有的细胞壁产生作用，阻碍其合成使其死灭。从化学构造上可分为D—内酰胺(青霉素类等)、大环内脂类、四环素类等10多种抗生素。 在这里表示具有代表性的化合物合成青霉享分析实例。使用ESI离子化法，检测出羟氨苄寿素、铁卡霉素的附加质子的正离子和氟氯青霉素脱去质子的负离子。 * 表示各标准品的MS质谱 * 表示青霉素混合物各成分的质子化(M+H)’，脱质子分子(M—H)—的选择离子(S工M)色谱图。 * 表示各成分的5点工作曲线(5ng/mL～1ug／ML n=5)。各成分在此浓度范围都显示出相关系数在0．999以上的良好线性。 * 与分析黄连素一样，使用三乙胺作为拖尾抑制剂，简易条件中中用高氯酸钠，另外，按简易条件不添加内标品番木鳌碱。 * 黄连素是碱性物质，通常的分析柱为硅胶基，易产生吸附，为了抑制吸附在流动相中添加相反的离子，用十二烷基磺酸钠，简便法用高氯酸钠。 * 黄连作为味苦健胃药在古代就已使用，即使现在也是胃药的原料药其主要物质为小檗碱等 * 因小檗碱与表小檗碱分子量相同，所以利用保留时间来区分 * 抗环血酸(AA)和脱氢抗环血酸(DHAA)在生物体内作为总维生素C进行定量的营养素，在临床医学，生物化学，食品化学，药物化学等领域内广泛进行分析。 用HPLC法分析两成分时，虽然AA与PHAA可以分离，但DHAA与AA相比，极大吸收波长为255nm，较短，而且吸光系数小，灵敏度低，因此，实际上直接检测测定困难。为此须将DHAA还元成AA后，作为总抗坏血酸量进行定量，由还元前后的定量值差求出DHAA量，由于必须用手法操作，非常容易产生人为的误差。 这次，了解到这两种成分在碱的条件下变化为300nm上具有极大吸收波长的结构，并发现在碱的条件下，添加氢化硼钠等还元剂，使DHAA灵敏度特别明显上升(申请专利中)o本文介绍在用HPLC法进行两成分同时分析方面，检测法应用二次柱反应衍生法取得的有效结果。 * 了解到DHAA，AA无论哪一