课件：血清学反应试验.ppt

酶标记抗体技术（免疫酶技术） 直接法 用酶标记抗体直接处理含待检抗原的标本，洗涤后浸于含有过氧化氢和DAB的显色反应液中作用，然后在普通光学显微镜下观察颜色反应，抗原所在部位呈棕黄色。 间接法 含待检抗原的标本先用未标记的抗血清处理，洗涤后再用相应的酶标记抗抗体处理，洗涤，然后浸于含有过氧化氢和DAB的显色反应液中作用，普通光学显微镜下观察颜色反应，以指示是否有抗原-抗体-抗抗体复合物存在 。 酶联免疫吸附试验（简称ELISA） 将抗原或抗体吸附于固相载体的表面，酶标记物与相应的抗体或抗原反应后，形成酶标记抗原抗体复合物，在遇到相应底物时，结合物上的酶催化底物产生水解、氧化或还原等反应，从而生成可溶性或不溶性的有色物质，可用肉眼或酶标测定仪判定结果。颜色的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，因此，可根据颜色的深浅来定量抗体或抗原。 直接法 将已知抗原吸附在固相载体表面，洗除未吸附的抗原，加入一定量的酶标记抗体与样品(含有抗原)提取液的混合液，竞争温育后，在固相载体表面形成抗原-抗体-酶复合物。洗除多余部分，加入酶的底物。在酶的催化作用下，底物发生降解应，产生有色物质。通过酶标检测仪，测出酶底物的降解量，从而推知被测样品中的抗原量。? 间接法 将已知抗原吸附在固相载体表面，洗除未吸附抗原，加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液，竞争温育后，在固相载体表面形成抗原-抗体复合物。洗除多余抗体成分，然后加入酶标记的抗抗体，与吸附在固体表面的抗原-抗体复合物相结合，再加入酶的底物。在酶的催化作用下底物发生降解反应，产生有色产物，通过酶标检测仪测出酶底物的降解量，从而推知被测样品中的抗原量。 斑点酶联免疫吸附试验 以纤维素薄膜为固相载体，在膜上进行免疫酶反应。先将抗原或抗体吸附在纤维素膜的表面，通过相应的抗体或抗原和酶标记物的一系列反应，形成酶标记抗原抗体复合物，加入底物后，结合物上的酶催化底物使其水解、氧化成另一种带色物质，沉着于抗原抗体复合物吸附部位，呈现出肉眼可见的颜色斑点，试验结果可通过颜色斑点的出现与否和色泽深浅进行判定。 免疫转印技术(immuno-blot) 1979年Towbin将核酸转印技术（Southern blot）应用于蛋白质研究，建立了蛋白质转印技术（Western blot）。 免疫转印技术的基本原理是将凝胶电泳与固相免疫测定结合起来，将经电泳分区的蛋白质精确且近似定量地转移到固相载体上如硝酸纤维素膜(NC膜)，并保持其原有的生物活性，再经荧光免疫、酶免疫、放射免疫技术等进行测定，可得以定位、定性和定量结果。实质上分3步骤即蛋白质组分分离、各组分转印及免疫检测。 免疫转印技术操作步骤 1. 蛋白质分离 采用聚丙稀酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electrophoresis, PAGE)进行分离。 2. 蛋白质转印 从凝胶上将蛋白质转移至NC膜 等固相载体的过程即为蛋白质转印。 3. 蛋白质的免疫检测 将已转印NC膜封闭，用酶免疫组化技术、免疫金组化技术等检测。 免疫转印技术方法评价 免疫转印技术综合了PAGE的高分辨力和免疫标记技术的高度特异性和敏感性。PAGE具有电荷效应、分子筛效应和浓缩效应，使之具有高度的分辨力，在同一固相载体上可作多项成分的分析。 中和试验　　 病毒或毒素与相应抗体结合后，丧失了对易感动物、鸡胚和易感细胞的致病力，称为中和试验。 中和试验 中和试验 免疫磁珠富集方法检测肠出血性大肠杆菌O157：H7 检样25g 传统的增菌培养 取一定量的增菌液+ Dynabeads anti- O 157 磁珠反应一定时间 在磁场中倒掉液体 用缓冲液清洗几次 收集磁珠+ E.Coli O157复合体 在选择性培养基上进行培养 优点：准确率高、可靠、灵敏度高，特异性强。 Thanks 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * 协同凝集试验 协同凝集试验 　　葡萄球菌A蛋白是大多数金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与多种哺乳动物血清中的IgG分子的Fc片段相结合，结合后的IgG仍保持其抗体活性。当这种覆盖着特异性抗体的葡萄球菌与相应抗原结合时，可以相互连接引起协同凝集反应，在玻板上数分钟内即可判定结果(加图图八)。目前已广泛应用于快速鉴定细菌、霉形体和病毒等 抗原抗体反应类型间接凝集反应 碳粉凝集试验 炭粉凝集试验 　　以极细的活性炭粉作为载体的间接凝集试验，称为炭粉凝集试