课件：酶赵玉娥.ppt

除去杂蛋白 酶和杂蛋白的性质差异大体上可有以下几个方面，根据这些差异.其分离方法可有： (1)根据分子大小轻重设计的方法。如离心分离法、筛膜分离法、凝胶过滤法等。 (2)根据溶解度大小分离的方法、如盐析法、有机溶剂沉淀法、共沉淀法、选择性沉淀法、等电点沉淀法等。 (3)按分子所带正负电荷多少分离的方法，如离子交换分离法、电泳分离法、聚焦层析法等。 (4)按稳定性差异建立的分离方法，如选择性热变性法表面变性法等。 (5)按亲和作用的差异建立的分离方法，如亲和层析法等. 3.7.2 酶活力 酶活力：酶催化一定化学反应的能力称酶活力，酶活力通常以最适条件下酶所催化的化学反应的速度来确定。 转换系数：转化底物的分子数 / 秒·每个酶分子 活力单位（active unit） 习惯单位（U）: 底物(或产物)变化量 / 单位时间 国际单位（IU）: 1μmoL变化量 / 分钟 Katal（Kat）： 1moL变化量 / 秒 比活力= 总活力单位 总蛋白mg数 = U(或IU) mg酶蛋白 量度酶催化能力大小 量度酶的纯度 比活力（specific activity） 对液体酶：用活力单位/ml酶液来表示。 酶活力及酶量的表示方法 终点法: 酶反应进行到一定时间后终止其反应，再用化学或物理方法测定产物或反应物量的变化。 动力学法:连续测定反应过程中产物\底物或辅酶的变化量，直接测定出酶反应的初速度。 酶活力测定方法：终点法 动力学法 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * 双倒数作图法 练习：已知某酶的Km值为0.05mol.L-1，要使此酶所催化的反应速度达到最大反应速度的80％时底物的浓度应为多少？ Km在实际应用中的重要意义 （1）鉴定酶：可以鉴别不同来源或相同来源但在不同发育阶段、不同生理状态下催化相同反应的酶是否为同一种酶。 （2）判断酶的最佳底物：如果一种酶可作用于多个底物,就有几个Km值，其中Km最小对应的底物就是酶的天然底物。如蔗糖酶既可催化蔗糖水解(Km=28mmol/L),也可催化棉子糖水解(Km=350mmol/L),蔗糖为天然底物。 （3）计算一定速度下的底物浓度：如某一反应要求的反应速度达到最大反应速度的99%，则[S]=99Km 3.6.3pH对酶反应速度的影响 ?过酸过碱导致酶蛋白变性 ?影响底物分子解离状态 ?影响酶分子解离状态 ?影响辅助因子的解离 pH 最适 pH v 最适pH：酶促反应速度最快时的环境pH。 3.6.4温度与酶反应速度的关系 ? 在达到最适温度以前，反应速度随温度升高而加快 ? 酶是蛋白质，其变性速度亦随温度上升而加快 ? 酶的最适温度不是一个固定不变的常数.反应时间越长，最适温度越低。 v 最适温度：酶促反应速度最快时的环境温度。 3.6.5激活剂对酶作用的影响 类别 金属离子：K+、Na+、 Mg2+、Cu2+、Mn2+ 、 Co2+、Fe2+ 阴离子： Cl-、Br- 有机分子 还原剂：抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽 金属螯合剂：EDTA 凡是能提高酶活性的物质，称为酶的激活剂（activator）。 3.6.6抑制剂对酶作用的影响 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质统称为酶的抑制剂（inhibitor） 。 类型：不可逆抑制剂 可逆抑制剂 应用：研制杀虫剂、药物 研究酶的作用机理，确定代谢途径 抑制剂类型和特点 竞争性抑制剂 可逆抑制剂 非竞争性抑制剂 反竞争性抑制剂 非专一性不可逆抑制剂 不可逆抑制剂 专一性不可逆抑制剂 1.非专一性不可逆抑制剂 抑制剂作用于酶分子中的一类或几类基团，这些基团中包含了必需基团，因而引起酶失活。 如：重金属对疏基酶的