课件：酶学基础三.ppt

终点法: 酶反应进行到一定时间后终止其反应，再用化学或物理方法测定产物或反应物量的变化。 动力学法:连续测定反应过程中产物\底物或辅酶的变化量，直接测定出酶反应的初速度。 （二）酶活力的测定 ?测定初速度 ?最适条件 ?[S] 》[E] 要求 斜率=[P]/ t = V（初速度） [P] t 酶活力的测定的具体方法 1）比色法 适用于酶的催化产物与特定物质反应生成有色的溶液 2）分光光度法 产物吸光度值与底物不同 3）滴定法 4）量气法 5）同位素测定法 6）酶偶联分析法 葡萄糖＋O2 葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸＋H2O2 H2O2+4-氨基安替吡林 过氧化物酶 H2O +醌类化合物 在500nm处测定光密度 酶活力的测定： 根据酶催化的专一性，选择适宜的底物，并配制成一定浓度的底物溶液； 根据酶的动力学性质，确定酶催化反应的温度、pH、底物浓度、激活剂浓度等反应条件； 在一定条件下，将一定量的酶液和底物溶液混合均匀，适时记下反应开始的时间； 反应到一定的时间，取出适量的反应液，运用各种生化检测技术，测定产物的生产量或底物的减少量。 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * * 酶学基础（三） 1.1.5 酶促反应的机制1. 酶－底物复合物的形成 (1)中间产物学说： E+S ES E+P (2) 酶与底物结合特点： 1）可逆的、非共价的结合； 2）底物只与酶的活性中心结合； 3）酶与底物结合是通过一种称为诱导契合模式进行的。 k1 k-1 k2 酶促反应：E + S === ES ?? EP ? ?? E + P 反应方向, 即化学平衡方向,主要取决于反应自由能变化?H?。 而反应速度快慢,则主要取决于反应的活化能Ea。 催化剂的作用是降低反应活化能Ea,从而起到提高反应速度的作用? 2. 活化能降低 活化能：在一定温度下，1mol底物全部进入活化状态所需的自由能，单位J/mol。 E+S P+ E ES 能量水平 反应过程 ?G ?E1 ?E2 S 酶催化作用的本质是酶的活性中心与底物分子通过短程非共价力(如氢键,离子键和疏水键等)的作用，形成E-S反应中间物。 其结果使底物的价键状态发生形变或极化，起到激活底物分子和降低过渡态活化能作用。 3、影响酶催化的有关因素 (1)底物与酶的靠近及定向 (2) “张力”和“形变” (3) 酸碱催化 (4) 共价催化 (5) 金属离子催化作用 在酶促反应中，底物分子结合到酶的活性中心，一方面底物在酶活性中心的有效浓度大大增加，有利于提高反应速度； 另一方面，由于活性中心的立体结构和相关基团的诱导和定向作用，使底物分子中参与反应的基团相互接近，并被严格定向定位，使酶促反应具有高效率和专一性特点。 3、影响酶催化的有关因素(1)底物与酶的靠近及定向 临近效应 定向效应 (2) “张力”和“形变” 底物与酶结合诱导酶的分子构象变化，变化的酶分子又使底物分子的敏感键产生“张力”甚至“形变” ，从而促使酶－底物中间产物进入过渡态。 (3) 酸碱催化： 一般都是广义的酸－碱催化方式。 广义酸－碱催化是指通过质子酸提供部分质子,或是通过质子碱接受部分质子的作用，达到降低反应活化能的过程。 广义氢的供体 广义氢的受体 组氨酸的咪唑基： （1） pI值约为6.7-7.1，在接近中性的条件下，一半以广义酸的形式存在，另一半以广义碱的形式存在，因而它既能作为质子供体，又能作为质子受体，有效地进行酸碱催化。 （2）咪唑基供出和接受质子的速度很快，其半衰期短，小于0.1毫微秒。所以许多酶活性中心都有组氨酸残基。 酶分子中可作为酸碱催化的功能基团 (4) 共价催化 某些酶在催化过程中，能通过共价键与底物结合成不稳定的酶-底物复合物，这个中间产物很容易变成过渡中间物，反应的活化能大大降低。 1）亲核催化 指酶分子中具有非共用电子对的亲核基团攻击底物分子中具有部分正电性的原子，并与之作用形成共价键而产生不稳定的过渡态复合物，活化能降低。 2）亲电催化 亲电基团：Zn2+ 、Fe3+ 、Mg2+ 等 (5) 金属离子催化作用 金属离子可以和水分子的OH-结合，使水显示出