课件：基因工程操作的工具酶.ppt

分类： （1）BAP(bacterial alkaline phosphatase） :细菌碱性磷酸酶，来源于大肠杆菌 。 活性高，但耐高温和去污剂，抑制其活性较难。 （2）CIP（calf intestinal alkaline phosphatase ）:牛小肠碱性磷酸酶，来源于小牛肠 。 蛋白酶K消化，EDTA参与下，65℃加热1小时灭活。 碱性磷酸酶的主要用途有： （1）5’末端标记前的处理； （2）去除DNA片段的5’磷酸基团，防止自身连接； 6.末端转移酶 分子量60000D,在二价阳离子的作用下，催化dNTP加于DNA分子的3’羟基端。 底物： 带3’羟基端单链DNA或带3’羟基突出端的双链DNA。 用途： 1.载体或者cDNA加同聚尾。 2 .标记DNA3’末端。 7.核酸酶S1 S1核酸酶的基本特性：来自稻谷曲霉菌（Aspergillus oryzae） 水解单链核酸以及双链核酸中的单链区或单链末端，产生5’–核苷酸和5’末端为p的寡核苷酸。 Zn2+必需,最适pH范围为4.0 - 4.3,需要NaCl 10 - 300 mM. 降解单链DNA的速度比降解双链DNA快75000倍。 S1核酸酶降解单链DNA或RNA,产生带5’磷酸的单核苷酸或寡核苷酸。需要辅助因子Zn。 用途： (1) 去除DNA片断中突出的单链尾以产生平端。 (2) 打开双链cDNA合成中产生的发夹。 带切口的双链DNA S1核酸酶 8 .T4噬菌体多核苷酸激酶 催化ATP的γ-磷酸基团转移到DNA或RNA的5’末端。 来源于T4噬菌体感染的大肠杆菌细胞。已在多种哺乳动物细胞中发现了多核苷酸激酶。 用途： 1 .标记DNA或RNA5’末端。 2.对缺乏5’磷酸基团的DNA进行磷酸化或者合成接头进行磷酸化。 9. DNase Ⅰ 从牛胰中分离到的内切酶，水解双链DNA比单链DNA迅速，随着反应进行，双链底物减少，单链浓度增加，反应自动减速。 酶反应的最适pH在7左右，Mg2+、 Mn 2+和 Co2+是激活剂。 10.核糖核酸酶A 特异攻击RNA上嘧啶残基的3’端，切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。 举例：5’pApGpCpCpGpApApUpGpCpApG3’ 5’pApGpCp＋? 5’pApGpCpCpGpApApUpGpCpApG3’ 5’pApGpCp＋Cp ＋GpApApUp ＋GpCp ＋ApG RNaseU2 RNaseU2的碱基专一性与RNase A互补，特异水解RNA链中嘌呤核苷酸的3’-磷酸基团与相邻核苷酸的5’-OH之间的键，生成以3’-嘌呤核苷酸和以3’-嘌呤核苷酸为末端的寡核苷酸。 11.核糖核酸酶T1 一种内切核糖核酸酶。特异作用于鸟嘌呤核苷酸3’端磷酸并切断相连的磷酸二酯键。 举例：5’pApGpGpCpCpGpApApGpUpGpCpApGpC 5’pApGp ＋Gp ＋? 5’pApGpGpCpCpGpApApGpUpGpCpApGpC 5’pApGp ＋Gp ＋CpCpGp ＋ApApGp ＋UpGp ＋CpApGp ＋C 本章小结 1 工具酶 2 限制性内切酶 3 聚合酶 连接酶 碱性磷酸酶 末端转移酶 核酸酶S1 T4噬菌体多核苷酸激酶 1.给你一种mRNA,按适当顺序列出从mRNA 的cDNA克隆到表达载体你所运用到的所有酶？ 答案：(1) 逆转录酶 (2)DNA聚合酶 (3)S1核酸酶 （4）限制性内切酶 (末端核苷酸转移酶） (5) DNA连接酶 思考题 1 什么是限制修饰？ 2 在基因工程中应用最广泛的是 型限制性内切酶。 3 Eco RⅠ 的识别切割序列是： 。 4 具有相同的识别序列，相同的酶切位点的酶叫 。 5 浓缩的酶液可以用水稀释。（ ） 6 酶切反应的温度是37℃。（ ） 7 依赖于RNA的DNA聚合酶是 。 8.防止DNA自身环化的酶是 。 9 能够在DNA分子的3’羟基端加dNTP的酶是 。 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、