课件：细菌性食源性疾病及其病原学检验规程.ppt

* * 概况 1885年德国人艾希自人畜肠腔分离出（E.coli），人类认识该菌为正常细菌 1945年Bary自病儿腹泻便中大量检出E.coli，并证实该E.coli是病源 逐渐认识E.coli有两类：正常E.coli和致泻E.coli EIEC、EPEC、ETEC 1982年美国发现有种E.coli引起出血性肠炎（HC）和溶血性尿毒综合征（HUS） 1987年levine提出EHEC概念，指出SLT毒素是病因 1996年日本9000名儿童暴发，11人死亡， E.coli O157：H7 1999年我国暴发？ 大肠杆菌 0157 : H7检测 大肠杆菌O、H抗原不同分成200多血清型 山梨醇不发酵（95% E.coli 发酵） 葡萄糖醛酸酶阴性（ 96% E.coli 阳性） 判断为肠出血性大肠杆菌（EHEC），除血清型符合0157 : H7或H-外，还须证实SLT（VT）阳性 李斯特菌检测 该菌1926年被确认为是人兽共患病菌，但很快受到重视： 分布广泛，在全世界的土壤、水中都有存在，温带比热带更多见 易感动物多，除人类外，迄今已从42种哺乳动物，22种禽类、鱼类、甲壳动物中分离出来，其中易感性最高的是牛、兔、犬、猫 低温下可生长，虽然此菌属于中温型，但其生长温度宽，为1—45℃在4－6℃的低温下也可繁殖。因此，放在冰箱中的食品，或经冷藏运输的食品，如有此菌存在，它们都可生长繁殖并使人致病 1988年世界卫生组织证实为食物中毒病原菌： 此菌可以通过水源、食品原料、厨房食物制作中任何一个环节的污染传播给人类。主要的食品有4种：①牛乳和乳制品：②肉类，特别是牛肉及其制品；③蔬菜、沙拉等食品；④海产品 概况 本菌为革兰氏阳性杆菌，菌体短小，直或稍弯 在22℃～25℃环境可形成4根鞭毛，故在25℃肉汤培养物中运动活泼，37℃基本无动力。 幼龄培养物为革兰氏阳性，衰老培养物可转为革兰阴性，呈两极着色，易误认为双球菌。 形态、动力与染色 本菌营养要求不高，在20-25℃培养有动力，穿刺培养，2-5天可见倒立伞状生长 该菌的生长范围为2--42℃（故可用4℃冷增菌以抑制其它杂菌的干扰），最适培养温度为35--37℃ 初期在5%羊血琼脂平板上菌落细小、露滴状、光滑、透明，后变灰暗。单核细胞增生李斯特菌、绵羊李斯特菌、西尔李斯特菌在血平板上的菌落有狭窄的β-溶血环 培养特性 弯曲菌检测 本菌为革兰阴性菌，呈S形、螺旋状或纺锤 生长要求为微量的有氧条件 培养最适宜温度为42℃ 在选择性平皿上，可形成两类菌落 1.第一型菌落不溶血、灰白色、扁平、湿润、有光泽、有扩散趋势，看上去象水滴，有从接种划线向外扩散的倾向 2.第二型菌落不溶血、菌落是分散单个的(直径1～2mm)凸起，完整发亮的菌落 形态、培养特性 快速检测技术在疾病控制系统微生物检验中的应用 上海市疾病预防控制中心陈悦 微生物诊断的演化(A) 1673年：显微镜发明 1880年：人工培养基发明 1914年：干燥培养基发明 1970年以前：忙于分离各种细菌，采用生化及血清学鉴定 微生物诊断的演化(B) 1970年以后：电脑化+细菌数值分类鉴定的应用 1980年：微量快速生化的应用及全自动鉴定系统的产生 1985年以后：各种免疫及核酸技术的广泛应用 培养基的进步 利用细菌的专有酶进行快速筛选 原有筛选培养基的不足：SS、Mac、WS、XLD 沙门氏菌具有辛酸酯酶，以β-萘酚辛酯为底物，经沙门氏菌酶解，释出β- 萘酚与固兰作用出现紫红色 大肠埃希氏菌具β-葡萄糖醛酸酶，但以O157：H7为代表的肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）却不具此酶，故β-葡萄糖醛酸酶阴性已成为初步筛查EHEC的重要特征 E.coli O157 : H7 ID 显色培养基典型菌落 O157：H7墨绿色菌落 沙门菌粉色菌落 沙门菌 ID 显色培养基典型菌落 细菌微量快速鉴定系统（手工）API MicroScan Rap-ID Enterotube 细菌鉴定的微量多项试验套组可使微生物有一标准的鉴定材料，不会因为所使用的培养基不同而鉴定出不同菌名。 可缩短鉴定的时间。 传统试管鉴定法需配制各种不同培养基，非常麻烦，而鉴定套组一次可配上好几百个，可存放。 套组鉴定可以给细菌一个号码，代表生物型号码，以此作为追踪传染源的依据。 细菌微量快速鉴定系统（自动） VITEK ， ATB VITEK 直接从标本中检查微生物抗原 应用单克隆抗体结合各种形式的放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、荧光免疫分析（FIA）、时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）、化学发光免疫分析（CIA）、生物发光免疫分析（BIA）等，足以检出临床标本中痕量的微生物抗原，免去细菌或病毒