课件：酶活力及酶.ppt

主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * 米氏常数Km的意义 不同的酶具有不同Km值，它是酶的一个重要的特征物理常数。 Km值只是在固定的底物，一定的温度和pH条件下，一定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的Km值。 Km值表示酶与底物之间的亲和程度：Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。 米氏常数的测定 基本原则：将米氏方程变化成相当于y=ax+b的直线方程，再用作图法求出Km。 1 Km 1 1 ??? = ?? ? ??? + ?? V Vmax [S] Vmax A. 取米氏方程式的倒数形式： 1/Vmax 斜率=Km/Vmax -1/Km 米氏常数Km的测定： B、E-H法 两边分别乘以Km+[S]／[S]，得 v=-Kmv/［S］+Vmax 酶的Km在实际应用中的意义 鉴定酶：通过测定Km，可鉴别不同来源或相同来源但在不同发育阶段，不同生理状态下催化相同反应的酶是否是属于同一种酶。 判断酶的最适底物（天然底物） 。 计算一定速度下底物浓度。 了解酶的底物在体内具有的浓度水平。 判断反应方向或趋势。 判断抑制类型。 可逆抑制(reversible inhibition) 及其动力学 E+I EI 可逆抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。根椐抑制剂与酶结合的情况，又可以分为三类。 1. 竟争性抑制 某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心之外，其结果是酶促反应被抑制了。  + I EI ES P+ E E+S 竞争性抑制作用 实例：磺胺药物的药用机理 H2N- -SO2NH2 对氨基苯磺酰胺 H2N- -COOH 对氨基苯甲酸 对氨基苯甲酸 谷氨酸 蝶呤 叶酸FH2 磺胺类药物可与对氨基苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶，影响FH2的合成，导致细菌生长繁殖受抑制，达到治病效果。 例: 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用 此酶的竞争性抑制剂还有： 竞争性抑制作用动力学 [E] = [Ef] + [ES] + [EI] Vmax = k3 [E] v = k3[ES] Vmax v = [Ef] + [ES] + [EI] [ES] Km = [Ef][S] [ES] [Ef]=[ES] Km [S] Ki = [Ef][I] [EI] [EI]=[Ef] [I] Ki 竞争性抑制作用动力学 竞争性抑制作用特点： 1）竞争性抑制剂的结构与底物结构十分相似，二者竞争酶的结合部位。 4）Vmax不变，Km增大 2）抑制程度取决于I和S的浓度以及与酶结合的亲和力大小。 [S] v V/2 km km ′ 无 I 有 I 3）可以通过增大底物浓度，即提高底物的竞争能力来消除。 2. 非竟争性抑制 酶可同时与底物及抑制剂结合，引起酶分子构象变化，并导致酶活性下降。抑制剂与活性中心以外的基团结合，不与底物竞争酶的活性中心，所以称为非竞争性抑制剂。 如某些金属离子（Cu2+、Ag+、Hg2+）以及EDTA等，通常能与酶分子的调控部位中的-SH基团作用，改变酶的空间构象，引起非竞争性抑制。 非竞争性抑制作用 + I EI+S ESI ES P+ E E+S + I 实例：重金属离子（Cu2+、Hg2+、Ag+、Pb2+） 金属络合剂（EDTA、F-、CN-、N3-） 非竞争性抑制特点： 1）抑制剂与底物结构不相似，抑制剂与酶活性 中心以外的基团结合。 2）Vm下降，Km不变 3）非竟争性抑制不能通过增大底物浓度的方法 来消除。 [S] v 无 I V/2 km 有 I (′) 非竞争性抑制作用动力学 3、反竞争性抑制作用 ESI ES P+ E E+S + I 酶只有在与底物结合后，才能与抑制剂结合，引起酶活性下降。 反竞争性抑制特点： 1）抑制剂与酶和底物的复合物结合。 2）Km和Vm下降 3）底物浓度增加，抑制作用加强。 反竞争性抑制作用动力学 有无抑制剂存在时酶促反应的动力学方程 表观 2、双底物酶促反应动力学 一）、顺序机制：底物的结合和产物的释放按一定顺序进行。 A、有序顺序