课件：生物化学实验食品.ppt

* * 2、滴定 （1）标定染料（标准维生素C液滴定）：准确吸取标准维生素C溶液10毫升（含1.0毫克维生素C）置100毫升锥形瓶中，用微量滴定管以0.1%2，6一二氯酚靛酚滴至淡红色出现，15秒钟不退色即为滴定终点。记录所用染料体积计算出1毫升染料相当于多少毫克维生素C（K值），即1/染料ml。 (2)样液滴定:准确吸取滤液10毫升放人100毫升锥形瓶内，滴定方法同前(做两次平行试验)，记录染料体积。 (3)空白液滴定：准确吸取10毫升2%草酸溶液，放入100毫升锥形瓶中，用上述方法滴定至终点，记录所用染料体积。（滴定过程宜迅速，一般不超过2分钟） X = （V1－V2）×K×V W×V3 ×100 X ：100克样品所含维生素C毫克数 W ：称取样品毫克数 V1：滴定样品所用染料毫升数 V2：滴定空白所用染料毫升数 V3：样品测定时所用滤液毫升数（即10毫升） V ：样品提取液稀释至总体积（即50毫升） K ：1毫升染料所能氧化维生素C之毫克数，可由标定算出 3、计算 实验六 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察 一、实验目的 了解琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制剂对其活性的抑制。 二、实验原理 甲烯白 琥珀酸脱氢酶 延胡索酸 琥珀酸 甲烯蓝 NAD+ NADH 无氧 丙二酸 － 三、实验步骤 1、酶的制备 猪心1.5～2g +1/15M磷酸氢二钠溶液3～4ml 匀浆 1/15M磷酸氢二钠溶液6～7ml，放置30min 2000r/min 离心10min，取上清备用。 试管号 心脏提取液（滴） 1.5%琥珀酸钠（滴） 1%丙二酸钠（滴） 蒸馏水（滴） 0.02%甲烯蓝（滴） 现象 1 5 5 —— 25 2 2 5（煮沸） 5 —— 25 2 3 5 5 5 20 2 4 5 25 5 —— 2 加好混匀，立即在各管中加入一层（约8滴）液体石蜡油，置37度恒温水浴保温30分，观察各管颜色变化，分析原因。然后用力振摇1号管，观察变化记录并解释。 2、酶促反应 实验一、温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 一、目的： 了解酶催化的特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响 二、实验原理 以唾液淀粉酶为例，观察温度、pH、激活剂和抑制剂对其活性的影响。唾液淀粉酶可水解淀粉生成糊精、麦芽糖、葡萄糖等物质。淀粉遇碘呈呈蓝色。糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应。 酶具有极高的催化效率，过氧化氢酶比铁粉的催化效率高出许多倍。 三、操作步骤 （一）温度对酶活性的影响 （唾液淀粉酶的制备：取漱口水0.5Ml，稀释至50ml，以下简称酶液） 1、 取3支试管，编号后按下表操作 2、在比色板上，置碘液2滴于各孔中，每隔1分钟，从第二管中取出反应液1滴与碘混合，观察颜色变化。 3、待第二管中反应液遇碘不发生颜色变化时，向各管中加入碘液1滴，摇匀，观察并记录各管颜色，做出解释。 试管号 0.5%淀粉溶液 稀释酶液 温度（10min) 现象 1 2 3 5ml 5ml 5ml 1ml 1ml 1ml 0℃水浴 37℃水浴 沸水浴 管号 1 2 3 0.5%淀粉 2 2 2 pH pH 5.0 2 pH 6.8 2 pH 8.2 2 稀释唾液（滴） 10 10 10 现象 二、pH对酶活性的影响 取试管5支，编号， 按下表操作。 摇匀，37℃水浴中保温。每隔l分钟从pH 6.8的管中（2号）取出1滴于白瓷板上，加碘液1滴，观察淀粉水解的程度。待颜色不变时，向各管中加碘液1-3滴。观察颜色，比较水解程度，做出解释。 三、酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 （氯离子是唾液淀粉酶的激活剂，铜离子是抑制剂）：取小试管3支，按表操作 试管号 0.5%淀粉 1%CuSO4 0.5%NaCl 蒸馏水 稀释唾液 结果 1 2 3 2ml 2ml 2ml 1 ml 0 0 0 1ml 0 0 0 1ml 1 ml 1 ml 1 ml 将3支试管放入37℃水浴中，在比色板上用碘液检查第2管，待不变色时向各管中加碘液1滴，记录颜色并解释。 四、酶的高效性 酶具有极高的催化效率，比普通催化剂活性高出很多倍。过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为二氧化碳和水，铁粉也能催化此反应，但二者的催化效率有很大差距。取小试管4支，编号，按下表操作。 试管号 1 2 3 4 2%H2O2（ml