课件：生化药物和基因工程药物分析概念.ppt

3、微量生理活性物质的测定 一些神经介质，激素等微量生理活性物质，由于其很强的生理活性，在体内浓度很低，加上体液中各种物质的干扰，很难用理化方法测定。而不少活性物质的生物测定法因灵敏度高、专一性强，对供试品稍作处理即可直接测定。 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * 二、杂质检查 （一）一般杂质检查 检查项目包括氯化物、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸度、溶液的澄清度或溶液的颜色、水分及干燥失重、炽灼残渣等。 （二）特殊杂质检查 许多药物是从生物组织中提取或用微生物发酵法制得，药物中易残存一些杂质或其他成分。 1、原料药的纯度分析 2、生产过程中杂质检查 三、安全性检查 （一）热原检查法（家兔、鲎试剂） （二）异常毒性试验 ：用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种试验动物，观察其急性毒性反应。反应的判断以试验动物死亡与否为终点。 （三）过敏试验（检查异性蛋白） 药物中若夹杂有异性蛋白，在临床使用时易引起病人多种过敏反应，轻者皮肤出现红斑或丘疹，严重者可出现窒息、发结、血管神经性水肿、血压下降，甚至休克和死亡。 （四）降压物质检查法 降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。 来源：用动物脏器或组织为原料制备生化药物，正常组织内存在的组胺及部分氨基酸脱羧形成的组胺、酪胺等胶类物质。 （五）无菌检查法 （检查活菌） 由于许多药物是在无菌条件下制备的，且不能高温灭菌。因此，无菌检查就更有必要。中国药典中几乎所有的注射用药如注射用尿激酶等，均做无菌检查。 1、无菌检查的基本步骤： ① 培养基的制备，为细菌生长、繁殖提供所必需的营养物质─碳源、氮源、维生素、矿物质等。 ② 选择对照用菌液，供对照试验用。 ③ 具体检查，如接种、培养等操作。 ④ 结果判断，得出阴性或阳性的结论。 2、注意事项： ① 无菌检查的全部过程应严格遵守无菌操作法，包括对操作环境、试验材料及用具酶灭菌等，防止微生物污染。 ② 应避免在有抑菌条件下操作。 ③ 从事无菌操作人员应具备微生物学的基础知识及一定工作经验，否则要经过无菌技能的培训，方能从事此工作。 （六）基因工程药物中可能杂质与污染物检查 可能杂质：残留DNA、宿主细胞蛋白质、内毒素等； 主要污染物：微生物、热原、病毒等。 主要检查项目：外源性DNA、其他外源性杂质测定 （七）致突变试验 包括：微生物回复突变试验、哺乳动物培养细胞染色体畸变试验、啮齿动物微核试验等。 （八）生殖毒性试验 包括：一般生殖毒性试验、围生期毒性试验。 四、含量（效价）测定 含量表示方法 百分含量，适用于结构明确的小分子药物或经水解后变成小分子的药物。 生物效价或酶活力，适用于酶类、蛋白质类等药物。 （一）含量测定 1、HPLC法 2、SDS法 （二）效价测定：采用国际或国家参考品，或经国家检定机构认可的参考品，以体内或体外法测定其生物学活性，并标明其活性单位。 第三节 常用定量分析方法及其应用 一、理化法 （一）化学分析法 1、重量法：根据样品中分离出的单质或化合物的重量测定所含成分的含量。 （1）提取法 （2）挥发法 （3）沉淀法 （二）电化学分析法 离子选择性电极：测量离子活度的指示电极。 2、滴定分析法：根据样品中某些成分与标准溶液能定量地发生酸碱中和、氧化还原或络合反应等进行测定。 （三）光谱分析法 1、比色法：样品与显色剂可发生颜色反应，依颜色反应的强度测定含量。如蛋白质的含量测定，可利用蛋白质与双缩脲试剂发生颜色反应，而进行定量测定。 2、UV法：样品或转化后的产物在某一波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，其浓度与吸收度成正比，则可进行定量测定。如蛋白质在280nm左右有最大吸收 。 3、荧光分光光度法：根据物质被UV光照射后产生的荧光强度进行定量测定。 （四）色谱分析法 1、HPLC法 （1）RP-HPLC法：适用于肽类、氨基酸、蛋白质和多糖的测定，如生白能。 固定相：C8、C18烷基硅烷键合相 流动相：甲醇-水、乙腈-水（甲醇）、乙腈-缓冲液 （2）高效离子交换色谱法（HPIEC） HPIEC特点如下： ① 蛋白质、多肽的分离是根据其相应的离子化程度而进行的。 ② 分离过程是以盐浓度增大的梯度洗脱法进行的