课件：实验肝功能检测.ppt

总胆汁酸（TBA）的测定原理（循环酶法）： 胆汁酸+Thio-NAD 3α-酮类固醇+Thio-NAD 3α-酮类固醇+NADH 胆汁酸+NAD 血清中微量的胆汁酸在多次酶循环过程中被放大，同 时可使生成的Thio-NADH扩增。在405nm处测定Thio- NADH吸光度变化值，即得血清中胆汁酸的含量。 肝功能检测-------胆汁酸代谢功能检测 3α-HSD 3α-HSD 试剂与器材： 标本：待检人血清 试剂：上海科华总胆汁酸（TBA）测定试剂盒 器材: 全自动生化分析仪，4℃冰箱、温育箱，移液头，离心机等 肝功能检测-------胆汁酸代谢功能检测 操作步骤： 分析类型：两点速率法 温度：37℃ S（标准液）：胆汁酸50u mol/L S：4ul R2：90ul R1:270UL 注：R1：Thio-NADN(β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型),Goods缓冲液 R2：NADH， 3α-HSD (3α-羟类固醇脱氢酶),Goods缓冲液，叠氮钠 肝功能检测-------胆汁酸代谢功能检测 孵育时间 延迟时间 读数时间 5分钟 30-60秒 2-3分钟 波长： 405nm（主） 600nm（副） 临床意义： 血清总胆汁酸的测定可为检测肝胆系统是否正常提 供一个灵敏的指标。血清总胆汁酸升高见于急、慢性 肝炎，肝硬化，原发性肝癌，胆汁郁积 ，酒精肝、中 毒性肝胆疾病及一些胃肠疾病。 肝功能检测-------胆汁酸代谢功能检测 天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的测定原理（速率法): 在AST速率法测定中，酶偶联反应式为： L-门冬氨酸+α-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADN+H+ L-苹果酸+NAD++H2O NADH的减少，引起在波长340nm处吸光度的下降， 下降速率与AST 活力成正比。 肝功能检测-------酶代谢功能检测 AST AST 试剂与器材： 标本：待检人血清 试剂：上海科华天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒 器材: 全自动生化分析仪，4℃冰箱、温育箱，移液头，离心机等 肝功能检测-------酶代谢功能检测 操作步骤： 分析类型：速率法 波长：340nm 温度：37℃ 理论K值：4180 毫摩尔消光系数：6.22 （NADH， 340nm） 注：R1：NADH, LDH,MDH R2:L-门冬氨酸，α-酮戊二酸 肝功能检测-------酶代谢功能检测 预孵育时间 延迟时间 读数时间 5分钟 1分钟 1-2分钟 S：60ul R1:1000ul R2:500ul 临床意义： AST（EC2.6.1.1）活力升高与心肌梗死有关，疼痛 4-6小时后明显升高，24-30小时后达到高峰。高水平 酶活力也见于肝细胞损伤，肌营养不良以及皮肤炎。 肝功能检测-------酶代谢功能检测 丙氨酸氨基转移酶（ALT）的测定原理（速率法): 在AST速率法测定中，酶偶联反应式为： L-丙氨酸+α-酮戊二酸 丙氨酸+L-谷氨酸 丙氨酸+NADN+H+ L-乳酸+NAD++H2O NADH的减少，引起在波长340nm处吸光度的下降， 下降速率与ALT 活力成正比。 肝功能检测-------酶代谢功能检测 ALT LDH 试剂与器材： 标本：待检人血清 试剂：上海科华丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒 器材: 全自动生化分析仪，4℃冰箱、温育箱，移液头，离心机等 肝功能检测-------酶代谢功能检测 操作步骤： 分析类型：速率法 波长：340nm 温度：37℃ 理论K值：4180 毫摩尔消光系数：6.22 （NADH， 340nm） 注：R1：NADH, LDH R2:L-丙氨酸，α-酮戊二酸 肝功能检测-------酶代谢功能检测 预孵育时间 延迟时间 读数时间 5分钟 1分钟 1-2分钟 S：60ul R1:1000ul R2:500ul 临床意义： A