课件：生物制药技术三.ppt

* * * * （二）杂交瘤技术 通过杂交瘤技术获得的杂交瘤细胞具备两种亲本细胞的特性。 杂交瘤技术包括免疫动物、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、克隆化培养、单克隆抗体的制备与鉴定等步骤，其关键技术是细胞融合技术。 利用杂交瘤技术生产单克隆抗体经历了一个漫长的发展阶段。 1975年，英国Milstein 和Kohlor将经绵羊细胞免疫的小鼠脾B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞在仙台病毒的诱导下进行融合，利用HAT选择性培养基筛选出融合后形成的杂交细胞，这种细胞既有小鼠骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量繁殖的本领，又有B淋巴细胞分泌特异性抗体的能力，使得单克隆抗体在体外生产成为可能。 利用杂交瘤技术 生产单克隆抗体的必备条件： 1、一个亲本是能产生抗体的细胞 2、另一亲本是能够无限生长繁殖 的细胞。 杂交瘤技术 免疫动物 细胞融合 筛选杂交瘤细胞 克隆化培养 单克隆抗体的制备与鉴定 单克隆抗体的纯化 （三）单克隆抗体的应用： 1 、新型诊断试剂： 在医学临床诊断方面，用于体外测定病人的血、尿或分泌物中各种特殊的蛋白质的含量，如寄生虫、细菌、病毒、癌细胞分泌的蛋白质以及由于代谢病或遗传病造成的特殊蛋白质等，进而判断身体是否有病，也可用来检测治疗过程中病变的情况。 红细胞表面的糖蛋白：A、B型 AB型：两种都带 O型：两种血型物质都不带 法国输血中心还研制出了可分辩A型、 B型、AB型血型的单克隆抗体诊断盒。 单克隆抗体可用在体内定位诊断上，不同的癌症或肿瘤在体内所表现出的癌抗原或瘤抗原不同，可以获得各种特异的单克隆抗体，再采用合适的同位素标记表使特异的单克隆抗体上带有放射性标记。 单克隆抗体在肿瘤治疗方面目前正显示着巨大的优势，其中治疗效果较好的有白血病、淋巴瘤、肾癌、肉瘤、黑色素瘤、肝癌以及胃肠道肿瘤等。 2、临床治疗： 利用抗体和抗原高度亲和的特点，单克隆抗体可以广泛应用于亲和层析，分离纯化蛋白质物质。 3、蛋白质提纯： 以抗体为载体的导向治疗药物的研究已有近20年的历史，已制备出百余种单克隆抗体，鉴定出数十种与肿瘤相关的抗原，但治疗试剂还没有达到商品化。 （四）抗体治疗药物 1、放射性核素标记的抗体治疗药物 抗体作为放射性核素的导向载体，操作简单、用量小，且能观察到药物在体内的分布和药物动力学，放射性标记的抗体有较大的杀伤范围，有利于克服肿瘤表面抗原的异质性，对肿瘤细胞的杀伤也不依赖抗原抗体结合后的吸收作用，由于分子量小，容易穿透到达肿瘤部位。 2、抗癌药物偶联的抗体药物 （1）、常用抗癌药 氨甲喋呤、阿霉素、丝裂霉素、环磷酰胺等，以人血清白蛋白为中间载体，可明显提高每分子抗体所携带的氨甲喋呤量，使体外细胞毒性提高倍。 （2）、抗体类药物的逆转耐药性 肿瘤细胞对抗原药物可产生多药耐药性。 毒素偶联的抗体药物 1、免疫毒素及其换代制品 毒素和抗体的交联物称为免疫毒素。 第一代免疫毒素是包含有A、B链的完整的毒素和抗体的交联物，应用有限， 第二代免疫毒素利用抗体或抗体片段与毒素作用，在体内有一定的抗肿瘤作用； 第三代免疫毒素—重组免疫毒素，特异性好，稳定性强，渗透性好，免疫原性低，可大量制备。 2、免疫毒素的制备 来源:主要是细菌毒素和植物毒素。 载体种类：小分子抗体FV和SCFV；细胞生长因子可与细胞膜上的受体结合；激素，可识别细胞表面的受体；CD4可识别HIV表达的糖蛋白。 先克隆出细胞基因，再利用基因重组技术去除毒素中非特异性结合部位基因，经过改造的毒素基因再与载体基因的互补DNA重组，转入受体菌中表达，形成融合蛋白，再经纯化可得到重组的免疫毒素。 3、免疫毒素的临床应用 可用于治疗肿瘤、自身免疫病、并能克服组织移植排斥反应，可单独给药也可包裹在脂质体及其他微粒中给药，在胞浆物质代谢中发挥作用，相对分子量小，渗透力强、效果好。 抗HBsAg的单克隆抗体生产工艺 抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)单克隆抗体是专一性识别HBsAg的单一抗体，能与HBsAg产生免疫反应。 临床上用于检测乙型肝炎病毒的感染并用于生产预防乙肝的免疫制剂，目前生产抗HBsAg的单克隆抗体技术有基因工程与细胞工程。 （五）单克隆抗体生产工艺实例 免疫大鼠脾淋巴细胞与大鼠骨髓瘤的IR