临床基因扩增检验的质量保证(新 - 临床聚合酶链反应测定的质不量保证.ppt

临床基因扩增检验的质量保证 卫生部临床检验中心 李金明 定 义 质量保证(Quality Assurance,QA) 为一产品或服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有计划的和系统的措施。 室内质量控制（Internal Quality Control,IQC) 由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。 定 义 室间质量评价 （External Quality Assessment, EQA） 为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的办法，连续、客观地评价实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的可接受性。当EQA用来为执业许可或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为实验室能力比对检验（Proficiency testing, PT）。在以前的文献中，EQA常描述室间质量控制。 定 义 准确度 (Accuracy) 待测物的测定值与其真值的一致性程度。准确度不能直接以数值表示，通常以不准确度来间接衡量。对一分析物重复多次测定，所得均值与其真值或参考靶值之间的差异亦即偏差即为测定的不准确度。 偏差 (Bias) 待测物的测定值与一可接受参考值之间的差异。 定 义 精密度(Precision) 在一定条件下所获得的独立的测定结果之间的一致性程度。与准确度一样，精密度同样也是以不精密度来间接表示。测定不精密度的主要来源是随机误差，以标准差（SD）和/或变异系数（CV）具体表示。SD或CV越大，表示重复测定的离散度越大，精密度越差，反之则越好。 定 义 批 (Run) 在相同条件下所获得的一组测定。 均值（Mean） 标准差（Standard deviation, SD或s） 变异系数（Coefficient of variation, CV） 定 义 正态分布(Gaussian distribution) 当一质控物用同一方法在不同的时间重复多次测定，当测定数据足够多时，如以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦即正态分布，又称高斯分布。 定 义 正态分布的基本统计学含义可用均数（）、标准差（s）和概率来说明。 临床基因扩增检验实验室常规测定步骤 标本收集：选择测定项目、标本收集和保存。 实验室测定：标本接收、贴标签、样本处理、核酸扩增、产物检测、测定的有效性和临床诊疗价值。 报告和解释：结果发出、结果解释和临床管理。 质量保证、室内质控和室间质评之间的关系 临床标本收集、运送、保存及其质量控制 标本收集 标本保存 标本运送 标本收集 标本采集时间对扩增检测结果的影响 标本采集部位的准备 标本的类型和采集量 采样质量的评价 采样及运输容器 标本采集中的防污染 标本采集时间对扩增检测结果的影响 在疾病发展过程中，标本采集过早或过晚都可能会给出假阴性结果。 标本采集部位的准备 标本采集部位的清洁消毒可去掉污染的微生物或其它杂物,但应适度,过度清洁消毒有可能会去掉或破坏靶微生物,故标本采集部位的准备应由训练有素的人员进行。 标本的类型和采集量 标本的类型: 血清(浆)、分泌物、痰、粪便、尿和脑脊液等。 标本的采集量:应根据所测病原体而定。一般来说，如果标本的量对病原体培养够用的话，则其量亦足以用于核酸提取及其后的扩增检测。 对于定量测定来说，对标本的收集要求更为精确。 采样质量的评价 血清(浆)标本:溶血、脂血等； 分泌物、痰：评价内容包括细胞组成，所需类型细胞的数量和核酸总量。 评价方法：包括肉眼观察,显微镜下观察和化学分析等。 采样及运输容器 标本的采集材料如棉签应为一次性使用； 运输容器亦应为密闭的一次性装置； 采样所用的防腐剂、抗凝剂及相关试剂材料不应对核酸扩增及检测过程造成干扰。 标本采集中的防污染 采集中要特别注意污染，防止混入操作者的头发、表皮细胞、痰液等； 如使用玻璃器皿，必须经高压灭菌，以使可能存在的RNase失活。 标本保存 靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此标本的保存对于核酸扩增测