细菌芽孢染色及酵母菌的观察 山东大学.docxVIP

山东大学实验报告 2011年 11 月 2 日 姓名 ** 班级 ********** 学号 ***************** 同组者：*************************** 科目 微生物学实验 题目 细菌芽孢染色及酵母菌的观察 组别 *** 第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 9 页 微生物实验报告·** 细菌芽孢染色及酵母菌的观察 【实验目的】 学习芽孢染色法，了解芽孢的形态特征； 观察酵母形态及出芽方式，区分酵母菌的死活细胞； 学习酵母子囊孢子的观察方法。 【实验原理】 A、细菌芽孢染色的基本原理 芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生位置、芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚、透性低而不易着色，但是芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力较强的染料，如孔雀绿，在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。再用对比度大的复染剂（如番红液）染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样就可以将两者区别开来。 在不同 HYPERLINK /view/19168.htm \t _blank 细菌中，芽孢所处的位置不同，有的在中部，有的在偏端，有的在顶端。芽孢一般呈圆形、椭圆形、圆柱形。常见的细菌芽孢形态和着生位置如下图所示： B、酵母菌形态及出芽方式观察的基本原理 酵母菌是一群单细胞的真核微生物。这个词语也是无分类学意义的普通名称，通常用于以裂殖或芽殖来进行无性繁殖的各种单细胞真菌。由于不同的酵母菌在进化和分类地位上的异源性，因此很难对酵母菌下一个确切的定义，通常认为，酵母菌具有以下5个特点：①个体一般以单细胞状态存在；②多数营出芽繁殖；③能发酵糖类产能；④细胞壁常含甘露聚糖；⑤常生活在含糖类较高、酸度较大的水生环境中。 单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，可在40倍显微镜下经过简单染色直接观察。酵母菌大多数采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过结合产生子囊孢子，进行有性繁殖。 由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法来观察酵母菌活体形态及出芽生殖方式。出芽繁殖是酵母菌进行无性繁殖的主要方式。成熟的酵母菌细胞，先长出一个小芽，芽细胞长到一定程度，脱离母细胞继续生长，尔后形成新个体。有多边出芽、两端出芽、和三边出芽。 酵母菌不同类型出芽方式 酵母菌不同类型出芽方式 同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。 C、酵母菌子囊孢子观察的基本原理 子囊类酵母菌是以接合产生形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖的。它们一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过质、核配和减数分裂形成4或8个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这些一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需一定条件，其中麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。 孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。 【实验器材】 菌种： 枯草芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌, 酿酒酵母7d麦氏（产孢培养基）液体培养物，酿酒酵母斜面培养物。 溶液和试剂： 0.01%美蓝水溶液，5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，95%乙醇，蒸馏水等。 香柏油、二甲苯 仪器及其它用品： 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿等 【操作步骤】 细菌芽孢染色的基本原理 实验流程图： 详细步骤： 涂片，加热干燥及固定 在洁净盖玻片接近中部两处分别滴一滴无菌水，分别接种枯草芽孢杆菌及梭状芽孢杆菌。然后按照常规方法加热干燥及固定； 孔雀绿加热染色 用木夹夹住载玻片，向载玻片上滴加5%孔雀绿水溶液使之完全覆盖涂菌部位，然后在酒精灯上微微加热（孔雀绿着色能力强，加热可使较难染色的芽孢染成绿