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* Notes: * Notes: * Notes: * Notes: * Notes: * Notes: * * Notes: * Notes: * * Notes: * Notes: * Notes: * * * * * * * Notes: * * * * Notes: * Notes: * Notes: * * Notes: * Notes: 局限性 表面上看，折射示差法的应用是不受限制的，实际并不如此，随着放大倍数a的增加，必须加大狭缝和提高检测器的灵敏度，导致噪声升高，且偏离线形。 2.双波长法和多组分测定 a b 比尔定律满足线性加和性； 用于悬浊液。 3.导数光谱法 作用：扣除慢变化背景和散射背景， 提高分辨率 导数光谱消除宽背景吸收干扰 分辨两个紫外光谱相近组份 2.5 紫外可见光谱法的应用 2.5.1定性分析：确定官能团异构，双键共轭情况等。 (1) 如 200~ 400 nm 无吸收,则无共轭。 (2) 如 230~ 270 nm 有吸收，e = 100~1000， 则有芳香化合物。 (3) 如 270~ 350 nm 有吸收， e = 10~ 100，且 200~270 nm 无峰，则为n--p*; 若200~ 270 nm 有峰，则可能是a、b--不饱和酮。 (4) 如 200~ 400 nm，则可能是长共轭体系或稠环、杂环化合物。 2.5.2 定量分析 定量分析的基础是比尔定律。 叶绿素含量测定； 氨基酸含量测定：水合茚三酮 580nm(蓝紫） 蛋白质含量测定： 利用苯丙氨酸，色氨酸，酪氨酸的芳香环吸收直接测定。 染色法：coomassie blue DOES IT ABSORB IN THE UV/VIS REGION? H N C H2 C H N H 2 C O O H Tryptophan MOLECULAR STRUCTURE OF COOMASSIE BRILLIANT BLUE SPECTRUM OF COOMASSIE BRILLIANT BLUE 2.5.3 其它应用 1.DNA纯度分析： A280：A260：A230 = 0.515 : 1 : 0.45 核酸及蛋白质的重要波长： 230 nm: 核酸光谱最小吸收，蛋白质肽键; 260 nm: 核酸 280 nm: 蛋白质的芳香氨基酸及肽； 320 nm: 蛋白、核酸均无吸收。 A C T G 脱氧核苷三磷酸盐（dNTP） G A C T 纯蛋白质（杂质） 282 nm 混合物 259 nm 双链DNA PCR 引物及其对应单链的熔点测定 熔化过程曲线及导数光谱 熔化过程曲线 本章要点 1.信息来源、定性定量特点及适应性; 2.仪器结构与性能的关系及其对分析结果的影响; 3.定量分析及误差计算。 练习答案 频率Hz 波数cm-1 题目 3*E(17) 1*E(7) 5.1*E(14) 1.7*E(4) 3*E(13) 1*E(3) 1.5*E(8) 5*E(-3) 1 2 3 4 小测验题 1．紫外光谱仪信号的能量、带宽、信噪比对定性、定量分析结果会造成哪些影响？ 2.某化合物在分析波长处的摩尔吸光系数为 1000/cm·(mol/L), 若所用分光光度计的读数误差 ΔＴ＝0.005，光程=10mm, 现有浓度Ｃ分别为０.３、３０毫mol/L 二种浓度的样品，计算在该分光光度计中的吸光度Ａ、透过率Ｔ，与由于仪器的读数误差产生的浓度测量相对误差Δc/c（将结果列表给出）。分别指出在上述二种情况下，减少浓度相对误差各自最有效的方法（１０0.3＝２）。 EFFECT OF SUBSTITUENTS 100 200 300 400 500 600 700 800 (nm) Hyperchromic Hypochromic Hypsochromic (blue shift) Bathochromic (r
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