冷皂化鄄高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式-分析化学.PDF

第43卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究简报 第3期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015年3月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 404 ~408 藡蕥蕥蕥蕥蕥蕥蕥蕥藡蕥蕥 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.140931 研 究 简报 藡蕥蕥蕥蕥蕥蕥蕥蕥 藡 冷皂化鄄高效液相色谱法测定乳制品中 叶黄素的5 种顺反式异构体 * 陈万勤摇 刘 柱摇 郑国钢 摇 茅佩卿摇 朱炳祺摇 丁宇琦摇 周赛静 (浙江省食品药品检验研究院,杭州310004) 摘摇 要摇 建立了冷皂化鄄高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式异构体。 将乳制品进行冷皂化处 理后,经正己烷鄄石油醚鄄二氯甲烷(2颐2颐1,V/ V)提取,使用YMCC30色谱柱分离,以甲醇和甲基叔丁基醚为 流动相进行梯度洗脱,采用二极管阵列检测器于445 nm波长下检测,外标法定量;在0.127 ~5.082 mg/ L 2 范围内的线性关系良好,相关系数(R )为0.9999,回收率在96.7% ~102.2%之间,RSD在4.1% ~5.4%之 间(n=6),检出限为0.010 滋g/ g(S/ N=3),定量限为0.030 滋g/ g(S/ N=10)。本方法简单、准确、灵敏度高, 适用于乳制品中叶黄素5种异构体的检测。 关键词摇 高效液相色谱法;叶黄素;异构体;乳制品 1摇 引摇 言 叶黄素(Lutein),又名黄体素,是存在于蔬菜、花卉、水果与某些藻类生物中的天然类胡萝 卜素。 [1] [2] [3,4] 叶黄素具有良好的预防人体衰老、动脉硬化 、抗氧化、抗癌功效 以及独特的护眼功能 等,在保 健品、化妆品和动禽类饲料等多个领域广泛应用。 美国FDA 于1995 年批准了叶黄素作为食品补充剂 [5] 用于食品中,我国2007年批准了叶黄素作为营养强化剂添加到婴幼儿或儿童配方食品中 。 叶黄素 分子结构中含多个共轭碳碳双键结构,由于烯键的存在,叶黄素可以存在多种几何异构体。 叶黄素不 [6,7] 同异构体在生物体内的生物活性也不同,其中全反式构象的生物活性较顺式构象要高很多 。 目前 市售的食品中很少有区分叶黄素不同异构体的含量。 因此,建立高效的叶黄素顺反异构体的检测方法 具有重要的意义。 目前叶黄素的检测方法主要以高效液相色谱法[8~10]和液质联用法[11,12]为主。 由于叶黄素在光和 热的作用下容易发生顺反异构化[13,14] ,因此样品的所有处理过程需在较低温度和避光条件下进行,避 免全反式叶黄素发生异构化。 所以到目前为止,国际市场上也只有全反式叶黄素标准物质在售, 尚未 有叶黄素顺式异构体的标准物质,对顺式异构体进行定量仍然是一个难题。 本研究采用全反式叶黄素 作为标准物质,对5种叶黄素异构体进行定量分析,并且对样品的前处理方法进行了研究,采用冷皂 化法进行样品的前处理,避免叶黄素在高温皂化时叶黄素发生异构化,采用液相色谱法结合YMC C30 色谱柱对叶黄素异构体进行有效分离,准确定量。 2摇 实验部分 2.1摇 仪器与试剂 Agilent1260高效液相色谱仪,配二极管阵列检测器(美国Agilent公司);紫外/ 可见分光光度计; 乙腈、甲醇(色谱纯,Merk公司);甲基叔丁基醚、石油醚、二