玉米大斑病菌黑色素合成还原酶基因酵母单杂交研究分析报告载体的构建.docVIP

个人收集整理 仅供参考学习 个人收集整理 仅供参考学习 PAGE / NUMPAGES 个人收集整理 仅供参考学习 玉米大斑病菌黑色素合成还原酶基因酵母单杂交报告载体地构建-农学论文 玉米大斑病菌黑色素合成还原酶基因酵母单杂交报告载体地构建 贾慧，郭丽婕，孟庆江，曹志艳，宋亚凤 （河北农业大学生命科学学院／河北省植物生理与分子病理学重点实验室，河北保定０７１０００） 摘要：根据玉米大斑病菌（Setosphaeriaturcica）黑色素合成还原酶基因Ｓｔ３ＨＮＲ、Ｓｔ４ＨＮＲ５′端侧翼序列和酵母单杂交报告载体ｐＨＩＳ２．１多克隆位点，设计了带有限制性内切酶位点地特异性引物，并以玉米大斑病菌０１－２３菌株基因组ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增启动子区域长度约１０００ｂｐ地片段，双酶切目地片段及载体ｐＨＩＳ２．１回收并连接，构建２个还原酶基因地酵母单杂交报告载体.结果表明，克隆到启动子区域长度为９９８ｂｐ核酸片段，经ＰＣＲ检测、测序、酶切鉴定，２个还原酶基因地酵母单杂交报告载体构建成功，为进一步研究还原酶与转录因子互作关系及明确黑素素合成调控机制奠定了基础. 关键词：玉米大斑病菌（Setosphaeriaturcica）；黑色素；酵母单杂交报告载体 中图分类号：Ｑ７８文献标识码：A文章编号：0439－８114（２０15）14－3542-04 DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2015.14.053 ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎofＲｅｐｏｒｔＶｅｃｔｏｒｓｏｆＭｅｌａｎｉｎＨＮｒｅｄｕｃｔａｓｅＧｅｎｅｏｆ ＳｅｔｏｓｐｈａｅｒｉａｔｕｒｃｉｃａｉｎＹｅａｓｔOｎｅ－ｈｙｂｒｉｄ ＪＩＡＨｕｉ，ＧＵＯＬｉ－ｊｉｅ，ＭＥＮＧＱｉｎｇ－ｊｉａｎｇ，ＣＡＯＺｈｉ－ｙａｎ，ＳＯＮＧＹａ－ｆｅｎｇ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＨｅｂｅｉ／ＨｅｂｅｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ， Ｂａｏｄｉｎｇ０７１００0，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｓｉｔｅｓｏｆｍｅｌａｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎｏｆｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅＳｔ３ＨＮＲ，Ｓｔ４ＨＮＲａｎｄｒｅｐｏｒｔｅｒｖｅｃｔｏｒｐＨＩＳ２．１ofＳｅｔｏｓｐｈａｅｒｉａｔｕｒｃｉｃａ，ｔｗｏｐａｉｒｓｏｆｐｒｉｍｅｒｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｓｉｔｅｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄ，ｔｈｅｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈａｂｏｕｔ１０００ｂｐｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＰＣＲｕｓｉｎｇｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｏｆＳ．ｔｕｒｃｉｃａ０１－２３ｓｔｒａｉｎａｓｔｅｍｐｌｅｔ，ａｎｄｄｏｕｂｌｅｄｉｇｅｓｔｅｄｂｙｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄｅｎｚｙｍｅｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｒｅｃｙｃｌｅｄａｎｄｃｏｎｎｅｃｔｅｄ，ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔｈｅｙｅａｓｔｏｎｅ－ｈｙｂｒｉｄｒｅｐｏｒｔｅｒｖｅｃｔｏｒｏｆｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｏｆｔｗｏｇｅｎｅｓｗｅｒｅｂｏｔｈ９９８ｂｐ，ｖｅｃｔｏｒｓｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙＰＣＲ，ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎ，ａｎｄｌａｙｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｅｔｏｓｐｈａｅｒｉａｔｕｒｃｉｃａ；ｍｅｌａｎｉｎ；ｒｅｐｏｒｔｖｅｃｔｏｒｓｏｆｔｈｅｙｅａｓｔｏｎｅ－ｈｙｂｒｉｄｓｙｓｔｅｍ 玉米大斑病是玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）地重要叶部病害，病斑呈梭形，直接影响玉米地产量和品质，造成严重地经济损失［１］.玉米大斑病菌（Ｓｅｔｏｓｐｈａｅｒｉａｔｕｒｃｉｃａ）是引起玉米大斑病地一种丝状病原真菌，在其侵入寄主过程中，主要依靠附着胞产生机械压力穿透植物表皮细胞［２，３］.成熟地附着胞内沉积着一层黑色素，黑色素是由病菌产生地一种非均质地不溶于水地无定形小颗粒状类多酚聚合体，其作为重要地毒力因子，在维持附着胞内机械压力方面起着重要地作用.玉米大斑病菌能够代谢ＤＨＮ黑色素，其在病菌附着胞壁上地沉积，保证了病菌能够产生足够地膨胀压力而穿透寄主组织致病［４］.对不同病原真菌中ＤＨＮ黑色素合成途径地研究结果表明，ＤＨＮ黑色素合成途径起始于聚酮体合成酶（Ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅｓｙｎｔｈａｓ