《离心层析电泳技术》.ppt

常用临床生物化学分析技术 离心、层析、电泳技术 常用临床生物化学分析技术 主要介绍： 离心技术、层析技术、电泳技术，在临床生物化学中的应用及应该注意的基本知识 物质的分离技术最普遍使用的有三大类，即离心技术、层析技术、电泳技术。 它们是三项基本的实验室分离技术。 一.离心技术： 简介： 离心现象是指物体在离心力场中表现的沉降运动现象，应用离心沉降进行物质的分析和分离的技术称为离心技术。 离心技术是根据颗粒在作匀速圆周运动时受到一个外向的离心力的作用而发展起来的。 尤其在生化检验方面，离心机是分离细胞、细胞器和生物大分子如核酸、蛋白质等必不可少的工具。 最简单的离心机由一个转头和一个驱动器组成，转头用来承载待处理的样品，驱动器则用来使转头以一定角速度作圆周运动以获得离心力。 现代化的离心机再辅以各种附属装置以保证转头的工作质量，维持一定工作环境或特定目的，并广泛采用电脑控制。 （一）.离心技术的分类 1.根据离心方法分类： （1）.平衡离心法： ①差速离心法：利用样品中各种组分的沉降系数不同而进行的分离方法。 ②速率区带离心法:：是根据样品中不同组分离子所具有的不同的体积尺寸大小和不同的沉降系数将混合样品进行离心分离提纯。. （2）.等密度离心法：又称等比重离心法，以离子密度进行分离。 （3).经典式沉降平衡离心法：在分析离心方法中是最常用的，用于生物大分子分子量的测定、纯度估计、了解构象变化等。 2.依据离心机转头的旋转速度分类： (1).低速离心：（4000r/min以内） (2).高速离心：（20000 r/min，最大相对 离心率可达45000g） (3).超速离心：（30000 r/min以上，最大相对离心率达645000 g） 3.按照离心技术的实际应用分类： (1).普通离心 (2).专用离心 (3).制备型离心 (4).分析型离心 （二）.各类型离心机的特点和应用： 1.低速离心机 (1).锥形台式离心机：体积小、重量轻、容量大，能自动控制工作时间，操作简便，使用方便，适用于医院检验科，生物化学化验室等对样品的初级处理。 (2).水平型桶式离心机 (3).大容量立式离心机 (4).带冷冻系统的大容量低速离心机 2.高速离心机：由于运转速度快，一般多配备冷冻控温装置，适用于各种生物细胞、病毒、血浆蛋白等有机物、无机物溶液、悬浮液及胶体溶液中有形成份的浓缩、提取、制备等工作，它是细胞生物学和分子生物水平研究的重要工具。 3.超速离心机： （1）.制备型超速离心机： 是临床医学、生物学、生物化学等研究领域重要仪器之一，利用高速回转所产生的巨大离心力对细胞器、病毒、生物大分子进行分离、浓缩和精致。 （2）.分析型超速离心机： 一般都装备有特殊设计的转头和控制系统，利用光学系统可直接观察和分析样品的沉降情况，利用特殊配备的数据处理机自动计算沉降系数、分子量。它主要用于生物大分子的分子量测定，评价样品纯度和检测生物大分子结构组态的变化等。 （三）.操作中注意事项： 普通医用离心机转速稍低，最常用，也最容易忽视安全，使用时必需每次做到： （1）.用前检查离心机电源开关，调速器等都应在起动状态（即每次用后应关好开关，退回调速器至起点）。 （2）.平衡转头上相对两管至等重：水平转头常连套管在一起，在灵敏度0.1g的天平上平衡至等重，平衡时要检查套管内有无损伤或以前破管时残留物，否则要先洗净，以免再次引起破管。角度转头只能用配管平衡，不能在转头的插孔中随意加水或放空管去平衡。 使用高速和超速离心机必须严格按操作说明书操作！原则上应牢记，大型机一旦发生操作事故，必比普通机严重百倍！ 二.层析技术： （一）.简介： 层析技术是一种现在已经广泛使用的物理化学分析法，是色层分析法或色谱分析法的简称。 层析法目前已发展成许多不同类型而又各具特色的方法，层析用的各种仪器也由最简单的自制组合装置发展成各种现代化，全自动的数据处理系统的层析仪，广泛用于各种与化学有关的领域，特别是生物化学的研究中。 (二).原理和分类: 层析技术是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术，各种层析方法都是利用物质在不互溶的两相之间，其吸附、溶解或亲和作用等理化性质上的差异，而将其从混合物中分离出来，加以鉴定的。 其中一项称为流动相（或称移动相），另一项则称为固定项。根据两相的特点，常将层析分为两大类： 流动相为液体的称为液相层析，流动相为气体的称为气相层析。 层析随其层析过程的机制即原理不同，又分为以下几种： 1.吸附层析：利用同一吸附剂对不同物质的吸附性能不同，可以在连续的吸附和解吸过程中达到使之