RT-PCR(包括引物设计)知识内容.ppt

实时荧光定量PCR技术的原理及应用 (Real time Quantitative PCR) 中山大学中山医学院;PCR：伟大的天才发明;PCR：理想与现实;;实时荧光定量PCR原理定量原理;实时荧光定量PCR 原理 -------荧光阈值;实时荧光定量PCR 原理 -------Ct值;实时荧光定量PCR 原理 -------Ct值的重现性;实时荧光定量PCR 原理 --------- 定量原理;实时荧光定量PCR 原理 --------- 标准曲线;确定未知样品的 C(t)值 通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量;以各自样本中内参（housekeeping）基因为标杆， 比较两样本中目的基因的相对丰度;;非特异性荧光标记： 1、 SYBR Green 特异性荧光标记： 2、TaqMan ;;SYBR Green 法 工作机理;实时荧光定量PCR原理 SYBR Green I 工作原理;实时荧光定量PCR原理 SYBR Green I 熔解曲线分析;实时荧光定量PCR原理 SYBR Green I 熔解曲线分析;SYBR Green 法 融解曲线分析;SYBR Green 法 优缺点 ;与目标序列互补;TaqMan法 工作原理;TaqMan法 优缺点;;;实验步骤;流程示意图;;反应体系;下游应用：是否检测其它基因？ 检测何种剪接体？ 是否会有二级结构干扰？ 检测灵敏度是否足够？ ;;一步法 or 两步法？;PCR体系Master mix的选择;Real-time PCR ;;;;PRIMER PREMIER 5.0;;上机操作;;;运行程序;结果分析;结果分析;Trouble shooting;外事问谷歌 内事问百度