双缩脲法测定血清总蛋白.pptVIP

双缩脲法测定血清总蛋白 临床生化实验室 一、实验目的 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理及操作。 了解血清总蛋白测定的临床意义。 二、实验原理 尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫红色的化合物，此反应称为双缩脲反应。 二、实验原理 蛋白质分子中含有肽键（—CO — NH — ）与双缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。 二、实验原理 紫红色络合物在波长为540nm处的吸光度与溶液中蛋白质的含量在一定范围内成正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得溶液中蛋白质的含量。 C测 = —— × C标 三、实验操作 三、实验操作 混匀，置25 ℃水浴放置30min或37℃水浴放置10min，以空白管调零，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度值。 四、结果计算 计算公式： 血清总蛋白（g/L）= ———— ×C标 五、方法学评价 目前常用的测定血清总蛋白的方法有如下五种经典方法： 　双缩脲法（Biuret法）：1~2mg 定氮法：灵敏度0.2~1.0mg 　Folin－酚试剂法（Lowry法）：50~100μg 　紫外吸收法：5μg 　考马斯亮蓝法（Bradford法）：1~5μg 五、方法学评价 双缩脲法优缺点： 优点 操作简单，使用方便，作为临床测定血清总蛋白的首选常规方法且重复性好。 缺点 灵敏度较低，比酚试剂法低100倍左右。 六、临床意义 血清总蛋白降低 1、蛋白合成障碍：肝功能严重受损 2、蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出； 大出血；肾病综合症等 3、营养不良或消耗增加：如低蛋白饮食；慢性消耗性疾病：结核病、恶性肿瘤等 4、血浆稀释：静脉注射过多低渗溶液或各种原因引起的水钠潴留。 六、临床意义 血清总蛋白升高 1、蛋白合成增加：多见于多发性骨髓瘤患者，主要是因为异常球蛋白增加 2、血浆浓缩：急性脱水、呕吐、腹泻等。 七、注意事项 双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反应！凡分子内含有2个或2个以上肽健（—CO — NH — ）的化合物均可呈双缩脲反应。 双缩脲法显色反应和蛋白质中肽健数成正比关系，与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的组成无明显关系。 七、注意事项 黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞等对本法有明显干扰，故用标本空白管来消除；因双缩脲试剂中含有CuSO4具有颜色，故用试剂空白管消除干扰。 七、注意事项 高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下列方法消除：取2支离心管，各家待测血清0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，混匀后离心。 因血清取量少，取量尽量准确。 碱液对玻璃仪器有腐蚀作用，尽量用塑料瓶装。 * * A测 A标 5.0 5.0 5.0 —— —— 双缩脲试剂 —— —— —— 5.0 —— 双缩脲空白试剂 —— —— 0.1 —— 5.0 蒸馏水 —— 0.1 —— —— —— 蛋白质标准液 0.1 —— —— 0.1 —— 血清 测定管 (U) 标准管 (S) 试剂空白管(RB) 标本空白管(B) 调零管 加入物 （ml） AU- ARB- AB AS-ARB 参考范围： 正常人：60~80g/L *