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3、半合成青霉素类: 如氨苄西林、阿莫西林等都是以百分含量计算。 以阿莫西林(p115)为例,原料要求以无水物计算,含C16H19N3O5S不得少于95.0%. 4、重量折算单位: 以青霉素钠(P121)为例,原料要求,以无水物计算,含C16H17N2NaON4S不少于96.0%。注射用青霉素钠标示量却以单位计,每1mg青霉素钠相当于1670青霉素单位。 二、抗生素制剂投料的问题: 1、考虑制剂的标示量的方式。 2、考虑水分、杂质等占的比例。 3、考虑原料的实际含量(效价) 二、管碟法材料、仪器及试剂的准备及基本要求 1、操作间:要求净化级别达到万级,安装紫外线杀菌灯,安装空调设备,能控制室温在20-25度之间。 2、双碟 为硬质玻璃或塑料培养平皿,内径约90mm,高16-17mm,碟底厚度均匀一致。使用前应清洗干净后置150℃-160 ℃干热灭菌2小时或者121 ℃高压蒸汽灭菌30分钟。 3、陶瓦盖 内径约103mm,外径108mm,平坦,吸水性强,应定期清洗、干燥。 4、钢管(牛津杯) 每次使用后应置1:1000新洁尔灭溶液内浸泡2个小时以上,进行灭菌后再进行洗涤,在150℃-160 ℃干热灭菌2小时备用。 使用同一批次的钢管。钢管内外壁要求清洁光滑,两端面应平坦光洁,管壁应厚薄一致,重量差异不超过0.05g 5、钢管放置器: 有全自动和半自动之分,一般为四孔,要求钢管下落时应垂直平稳、位置正确。应定期用75%酒精擦拭。 如果没有钢管放置器,也可用干热灭菌过的镊子放置钢管。 6、恒温培养箱: 有隔水式、电热式。要求温度控制在35 ℃ -37 ℃,隔板要求水平,用于细菌培养。 7、抑菌圈测定仪:用于测定细菌所致抑菌圈直径,也可以用游标卡尺进行测量直径。 8、超净工作台: 用于菌种的接种、传代和菌悬液的制备。超净台应放在洁净工作间或半无菌室内。 9、磷酸盐缓冲液: 根据兽药典附录或者品种项下要求的配方进行配制、分装、灭菌后备用。常用的缓冲液pH值有6.0、7.0、7.8等。 缓冲液的pH值对样品液的稳定性、细菌生长速度和抑菌圈边缘清晰等有影响。 10、培养基: 尽量购置质量稳定的干粉培养基(如中国兽药药品监察所、中国药品生物制品监察所等生产的培养基)。 常用的培养基有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号等培养基,用前应按使用说明书进行配制,注意调节培养基pH值。 11、菌种: 菌种应由中国兽医药品监察所和中国药品生物制品检定所等国家法定的菌种保藏中心提供。 常用的菌种包括: 枯草芽孢杆菌(CMCC63501)、 短小芽孢杆菌(CMCC63202)、 藤黄微球菌(CMCC28001)、 金黄色葡萄球菌(CMCC26003)等。 12、标准品 标准品是指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或者效价测定的标准物质,一般以效价单位标示,标准品应由国家法定的单位制备、标定和供应,一般常用的标准品来源于中国兽医药品监察所和中国药品生物制品检定所。 三、管碟法操作步骤 1、称量:标准品从冰箱内取出后,应放置至室温后称取。标准品的称取量往往少于100mg,需选用十万分之一的分析天平精密称量,称取量应大于10mg,并且为了减少实验误差,应使用小烧杯或特制的称量壶作为称量容器。 供试品称取量若少于100 mg,称取方法同标准品;供试品取量若多于100 mg,可直接使用称量纸在万分之一的分析天平上精密称量。称量过程中,不能裸手接触称量纸或称量容器。 液体制剂量取供试品体积的方法,粘稠的液体不便量取时,可采取称重,然后测定相对密度,折算称体积。 2.稀释 稀释标准品和供试品所用的缓冲液应用同一瓶内或同一次制备和缓冲液几瓶混匀后使用。为避免抗生素被玻璃吸附,在量取溶液时,要用被量取的溶液流洗3次。 3.制备底层 用灭菌的吸管吸取已融化的培养20ml注入培养皿中,稍后盖上陶瓦盖吸收水蒸汽,以免培养基温度过高,加盖陶瓦盖后冷凝水影响菌层的表面平整性(由于冷凝水的局部冷却和稀释作用,可使菌层培养基凝固后表面不平)。 4.制备菌层 取出试验菌悬液,吸取已试验妥的菌量加入已融化并保温在水浴中(一般细菌48℃,芽孢60 ℃),摇匀作为菌层培养基。然后吸取菌层培养基5ml,使其均匀摊在底层培养基上,置水平台上,用
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