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PAGE PAGE 1 快速诊断PRRSV高热变异株和北美株的RT-PCR检测试剂盒的研究与应用 第一部分 文献综述 1 猪繁殖与呼吸综合征 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory，PRRS），俗称“蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Virus，PRRSV）引起猪的一种繁殖障碍和呼吸系统的传染病，具有很强的传染性，不同年龄、品种和性别的猪均能感染，临床表现为母猪繁殖障碍，呈现流产、死胎、木乃伊胎及弱仔等症状，仔猪及育成猪主要表现为呼吸系统症状。本病于1987年在美国北卡罗来纳州首次发现，然后迅速向世界各地蔓延，先后在加拿大、日本、德国、荷兰、西班牙、法国、英国、丹麦等国家发生[1-7]。1991年初，我国台湾地区出现此病流行，于1996年分离到了引发该病的病原——猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，从而证实了本病在我国发生与蔓延的流行状况[8]。1995年孙颖杰等在我国进口美国的种猪中检测出5头种猪的病毒抗体呈阳性，同年中国农业科学院哈尔滨兽医研究所郭宝清等首次从国内疑似PRRS的猪场中分离到PRRSV，从而证实了本病在我国大陆地区的存在[9]。简中友等[10]对采自（1995-1996年）国内有生殖病史及疑似有PRRS猪场的47份血清样品进行检测也证实PRRS在我国已经存在并正在流行；随后有关本病在国内猪场频繁发生的报道就一直没有停止。现在本病己在世界各主要养猪国家和地区广泛存在和流行，已成为现代规模化养殖的主要疫病之一，严重影响养猪业的发展，给养猪业带来重大的经济损失。 2 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子学研究进展 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种具囊膜的单股正链RNA病毒，归属于动脉炎病毒科、动脉炎病毒属[11]，与该科其他成员之间在病毒形态、基因组、复制方式和蛋白组成上相似，但它们之间并无血清学交叉反应。病毒粒子呈球形，直径45-65nm，十二面体对称，核衣壳约25-35nm，上有长约5nm突起，外绕一层脂质双层膜，易被脂溶性溶剂如氯仿、乙醚等溶解，在氯化铯密度梯度中浮密度为1.13-1.19g/cm3，在蔗糖密度梯度中为1.18-1.23g/cm3[12]。 病毒无凝血性，不凝集猪、绵羊、山羊、牛、兔、豚鼠、鸡、鸭、鹅和人O型红细胞，但病毒用非离子除垢剂处理后，再用脂溶剂处理，则可凝集小鼠的红细胞。病毒对多种巨噬细胞具有亲噬性，包括肺泡巨噬细胞（PAM）、外周血单核细胞、肺血管内巨噬细胞（PAM）等．接种后24-72h可观察到特异的细胞病变，病毒量可达105-106/ml。猪脾巨噬细胞、脑小胶质细胞以及传代细胞系MA-104、Marc-145、CL-2621和CRL-1117等均可复制病毒。病毒在巨噬细胞中复制具有抗体依赖性病毒增强作用(ADE)。Yoon[13]的研究证实同一毒株对抗体的中和作用与抗体效价呈负相关，表明抗体的存在可增强对细胞的感染。 PRRSV基因组存在高度变异性，通过氨基酸序列比较发现，PRRSV更接近于小鼠乳酸脱氢酶病毒（LDV）。根据病毒基因组的差异，PRRSV可分为两个血清型：欧洲型（LV株为代表株）和美洲型（ATCC-VR-2332株为代表株）[14]，病毒的两个血清型间的氨基酸的同源性为78-81%，美国和欧洲分离的病毒毒株，在抗原特异性上存在差异。我国目前分离的PRRSV，应用多价血清和单克隆抗体检测，近似于美洲株，是否有欧洲型毒株存在尚不清楚。 PRRSV为不分节段、聚腺苷酸化、有囊膜的单链正股RNA病毒，其基因组长约为15kb，含有9个开放阅读框架（ORFs）[15]，病毒基因组的每个阅读框和相邻阅读框有部分重叠。ORF1是最大的一个阅读框，长约12kb，约占病毒基因组的80%，包括ORF1a和ORF1b，位于基因组的5，端，编码病毒RNA聚合酶，其上有长约189个核苷酸的5，端非编码区，高度保守。ORF2和ORF7为编码病毒基因组的结构基因，主要编码病毒的功能性蛋白。在ORF7终止密码子之后是3，非编码区，含有poly（A）结构，其长度在14-23个核苷酸之间（平均长度为17个核苷酸）[16]，在poly（A）尾上游有一个高度保守的八核苷酸序列。3，NCR在两种血清型毒株中的同源性尾76%，Meng等[16]认为这段序列的功能是聚合酶的结合区，用以启动负链RNA的合成。 3 PRRSV高热变异株和北美株概述 2006年6月，我国部分地区养猪场发生了无名高热病，主要是猪繁殖与呼吸障碍综合征病的变异株引起的“高热病”或“无名高热病”，引起养猪界的恐慌，可谓我国养猪业的一场浩劫，造成严重的经济损失。该病引起了国务院和农业部的高度重视，世界动