水杨酸的抑酶和抑菌作用.docVIP

厦门大学学报（自然版）投稿范文水杨酸的抑酶与抑菌作用 厦门大学学报（自然版）投稿范文 郑国兴，张春乐，黄浩，张丽娟，林敏，陈清西* （教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室，厦门大学生命科学学院，福建 厦门 361005） 摘要：以水杨酸为效应物，研究其酶学效应和微生物效应．实验结果表明：水杨酸对马铃薯多酚氧化酶有明显的抑制作用，半抑制率（IC50）为2.05 mmol/L，抑制作用表现为非竞争性的可逆过程，其抑制常数为2.00 mmol/L．水杨酸对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌三种细菌和白色假丝酵母、黑曲霉两种真菌均有明显的抑制作用，其最小抑菌浓度（MIC）分别为0.75、0.5、0.5、0.25和0.75 mg/mL，最小杀菌浓度（MBC）分别为0.75、1.0、0.5、0.25和0.75 mg/mL．本研究为水杨酸在果蔬保鲜中的应用提供实验理论依据． 关键词：水杨酸；马铃薯多酚氧化酶；细菌；真菌；抑制作用 中图分类号：Q 356．1 文献标识码：A 我国果蔬、蔬菜资源丰富，产量均居世界第一位．然而，因采后处理技术落后，我国果蔬腐烂损失也高居全球榜首，每年因贮藏、运输当中变质的果蔬占总产量的1/7，造成巨大的经济损失．导致果蔬腐烂变质主要有微生物感染和酶促褐变两种[1~3]．其中，引起果蔬腐败的微生物主要有细菌、杆…… 1 材料与方法 1.1 材 料 水杨酸、KCrO4、庆大霉素均为国产分析纯试剂[1~3]．马铃薯多酚氧化酶由本实验室制备．L-3,4-二羟基苯氨酸（L-DOPA）为Aldrich化学公司产品．大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色假丝酵母、黑曲霉均由厦门大学生命科学学院微生物教研室提供…… 方 法 （1）PPO活力测定 参考文献[4]方法，在50 mmol/L磷酸缓冲溶液（pH 6.8）中，以0.5 mmol/L L-DOPA为底物，30℃下测定波长为475 nm的光密度值（OD475）随时间的增长直线，从斜率计算酶的活力，产物的消光系数按3700 L/(mol?cm)计算[5]． （2）微生物实验 抑菌实验：采用琼脂渗透法，在已经培养好的斜面培养物中分别加无菌生理盐水5 mL，用接种环刮下菌苔制成菌悬液，分别取菌悬液1 mL加到已融化又冷却至适当温度的100 mL…… 收稿日期：2005-12-22 基金项目：福建省科技攻关课题（2004N002）和国家自然科学基金资助 作者简介：郑国兴 (1978 ~ )，男，硕士研究生． *通讯作者： HYPERLINK mailto:chenqx@jingxian.xmu.edu.cn chenqx@jingxian.xmu.edu.cn 2 实验结果 2.1 水杨酸对马铃薯PPO抑制效应 图1. 水杨酸对马铃薯PPO抑制效应.线1-5水杨酸的浓度为0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6 mmol/LFig. 1 Lineweaver-Burk plots of potato PPO inhibited by salicylic acid. 研究水杨酸对马铃薯PPO抑制作用类型，在测活体系中，固定酶的浓度，改变底物L-DOPA浓度，测定不同浓度抑制剂对酶的活力的影响．由Lineweaver-Burk双倒数作图得到一组横轴截距不变的直线，说明这一组抑制剂不影响米氏常数(Km)，只影响最大反应速度( 图1. 水杨酸对马铃薯PPO抑制效应. 线1-5水杨酸的浓度为0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6 mmol/L Fig. 1 Lineweaver-Burk plots of potato PPO inhibited by salicylic acid. 表1. 琼脂渗透法测定结果 Tab.1 The assay result of the agar diffusion method 效应物 浓度 E. coli B. subtilis St. aureus C. albicans A. niger DMSO ≥99.0％ ? ? ? ? ? 庆大霉素 80 U/mL 22 20(±) 25 ? ? KCrO4 1 mg/mL ? ? ? 14(±) 16(±) 水杨酸 40 18 15 22 12 12 注：“±”表示抑菌圈模糊，“?”表示无抑菌圈． 3 讨 论 …… 本文研究结果表明，水杨酸对于马铃薯PPO具有明显的抑制作用，它对该酶的活力表现为可逆非竞争性抑制作用．这说明抑制剂与酶分子的结合及底物分子与酶的结合是相互独立的，抑制剂不改变酶对底物的亲和力；抑制剂可以同时与