液相色谱串联质谱法测定银杏提取物中主要银杏酸含量的方法研究【开题报告+文献综述+毕业论文】.Doc

液质联用测定银杏提取物中银杏酸的方法研究 PAGE 10 PAGE III 本科毕业设计 开题报告 化学 液质联用测定银杏提取物中银杏酸的方法研究 一、选题的背景与意义 在生活水品不断提高的今天，健康与美丽成为人们不断追求的目标。作为天然活性成分的代名词——银杏便备受热捧。无论是时尚美丽的美容界，还是天然健康的保健品行业，又或者是不断探索的医药品领域，都随处可见银杏的芳名。尤其医疗领域中，银杏是一种药用历史悠久的植物，以银杏黄酮和银杏内酯为主要成分的银杏叶制剂是目前国际上流行的治疗心脑血管疾病的天然有效药物，许多国家都致力于银杏叶制剂的开发。银杏叶提取物（EGB）的化学成分不仅包括银杏黄酮/内酯等主要有效成分，还有银杏酸这一有害成分。银杏酸是国内外一致公认的潜在过敏物质，是自然界中最强烈的接触性过敏原中的成分之一，可引起严重的过敏反应，还会引起基因突变、神经损伤等。德国卫生部规定银杏提取物(EGb)制剂中银杏酸的含量必须小于5 ug/g。市面上竟然有人在EGB中利用芦丁等掺杂使假，但现行质量标准又无法控制，这个问题如果不解决，终究会影响银杏叶制剂的功效，损害并断送我国的银杏叶产业。所以，真正全面控制EGB的质量迫在眉睫[1]。我国是银杏种植大国，也是银杏叶提取物生产和出口大国，因此，建立准确的银杏酸检测方法就显得尤为重要。 研究的文献回顾： 目前就银杏酸的检测没有规定的国家标准，但是相关文献报道不少。其中关于由于实验者不同，实验方法也竞相各异，归纳起来大致有以下几大类不同的方法。 2.1 高效液相法 王志强黄胜海张琰曾报道过利用Agilent1100 高效液相色谱仪对SC-CO2萃取和甲醇回流萃取银杏果外种皮中的银杏酸进行含量测定 [2] 。 沈刚，姚渭溪报道过一种用改性的超临界二氧化碳萃取和离线的反相高效液相色谱分析银杏叶提取物中银杏酸含量的方法。以硅胶为载体，在30MPa、55℃ 条件下，8%甲醇作改性剂时的超临界二氧化碳萃取，最小检测限为0．42 mg/L[4]。 仰榴青，吴向阳，陈钧还报道过反相高效液相色谱法测定银杏外种皮中银杏酸含量的方法，该方法以 Inertsil ODS-2色谱柱，流动相为甲醇：3％ HAc溶液(92：8， V，V)，流速1．0 mL／min，检测限5．2 ng。但银杏外种皮提取物经硅胶柱层析预处理[5]。 孔玉霞，李晨恺，王盼盼，宋金玉报道了银杏酸含量的反相高效液相色谱测定方法。银杏酸在酸性盐溶液中，仅用正己烷萃取后的样品即可供HPLC分析，避免了多次浓缩过程。研究表明，此定量分析方法可用于银杏制剂中银杏酸含量的定量检测，最小检出量为0．41mg/L[8]。 2.2 紫外光度法 吴向阳，仰榴青，陈钧在《不同生长季节银杏叶中有毒成分银杏酸含量的测定》中报道过银杏叶经正己烷处理后用紫外分光光度法测定银杏叶中有毒成分银杏酸含量的方法。该方法最低可测至5.72×10-6，可用于银杏叶和银杏茶中有毒成分银杏酸的定量分析 [3] 。 2.3 液质联用法 何静仁，谢笔钧用LC/ESI一MS对银杏叶提取物中银杏酸进行鉴定，并用反相银化HPLC研究4种银杏酸的分离和含量测定。在银杏叶的乙醇浸提液中加酸性盐溶液和少量吸附剂后，用正己烷提取，浓缩后的残留物进行HPM 分析。流动相为甲醇：5% 乙酸(90：10),其中银离子浓度为0．03 mol/l 。HPLC和二极管阵列检测联用对银杏酸色谱峰进行光谱分析和纯度鉴定[9]。 陈学国，孔亮等报道过全二维液相色谱串联质谱分离分析模式，将质脂体色谱柱和ODS反相色谱柱作为二维分析色谱柱，二者通过一个连有两个0．5 mL定量环的八通阀耦联。质脂体色谱柱上的馏分在反相色谱柱上分离后，直接进入紫外一检测器，然后经分流器分流后进入大气压电离质谱方法来分析银杏叶提取物成分。不过该方法只给出了定性分析，并未给出定量分析结果[6]。 吴向阳,仰榴青,陈钧等报道了银杏叶提取物及其制剂经石油醚提取,提取液浓缩后用石油醚定容,HPLC直接测定,并用LC/MS对其中的银杏酸进行了定性鉴定。结果大致给出总银杏酸含量并未给出单一银杏酸含量[7] [10]。 Karine Ndjoko, Jean-Luc Wolfender等曾用LC - ESI- MS检测过银杏叶中银杏酸的含量，该方法需要经过氯仿等有机溶剂萃取，还要过硅胶柱等繁琐的前处理[15]。 综上所诉，目前检测银杏酸的方法主要以HPLC法为主，高效液相法的技术较成熟，但大多测定结果均未能达到5ppm以下的标准。紫外分光光度法用于定量分析误差较大，准确度不高。液质联用技术处于起步阶段有待进一步确定及提高，从而满足相关国际限量标准。 三、研究的技术路线与预期目标： 拟采取的技术路线 样品提取、净化、浓缩 样品提取、净化、浓缩