贵阳地区禽白血病血清学调查与病原核酸检测-预防兽医学专业论文.docxVIP

目 录 中文摘要 2 Abstract 3 HYPERLINK \l _bookmark0 缩略词表 5 文献综述 5 HYPERLINK \l _bookmark1 实验研究 HYPERLINK \l _bookmark2 1 材料 19 HYPERLINK \l _bookmark2 1.1 试验样本 19 1.2 主要试剂 19 HYPERLINK \l _bookmark2 1.3 主要仪器 19 HYPERLINK \l _bookmark2 2 方法 20 HYPERLINK \l _bookmark3 2.1 禽白血病血清学调查 20 HYPERLINK \l _bookmark3 2.2 禽白血病分型研究 20 HYPERLINK \l _bookmark4 2.3 禽白血病病原核酸的检测与分群 22 HYPERLINK \l _bookmark5 3 结果 28 HYPERLINK \l _bookmark5 3.1 禽白血病血清学检测结果 28 HYPERLINK \l _bookmark6 3.2 禽白血病的分型结果 29 HYPERLINK \l _bookmark7 3.3 禽白血病病原核酸的检测与分群结果 33 HYPERLINK \l _bookmark8 4 讨论 40 HYPERLINK \l _bookmark8 4.1 关于禽白血病血清学调查 40 HYPERLINK \l _bookmark9 4.2 关于禽白血病的分型 41 HYPERLINK \l _bookmark10 4.3 关于禽白血病病原核酸的检测与分群 42 HYPERLINK \l _bookmark11 5 结论 46 致谢 42 HYPERLINK \l _bookmark12 参考文献 48 HYPERLINK \l _bookmark13 附录一 52 附录二 53 贵阳地区禽白血病血清学调查与病原核酸检测研究 贵阳地区禽白血病血清学调查与病原核酸检测研究 贵州大学 贵州大学 2010 届硕士研究生学位论文 PAGE PAGE 1 PAGE PAGE 2 贵阳地区禽白血病血清学调查与病原核酸检测 中文摘要 [目的] 通过了解贵阳地区禽白血病(Avianleucosis, AL)病原体的血清学、发病类型和病 原类群情况，为贵阳地区禽白血病的预防与控制提供科学依据。 [方法] (1) 采用 ELISA 检测试剂盒对采自贵阳地区不同养鸡场鸡血清样本进行禽白血病抗 体检测，以了解贵阳地区禽白血病的流行情况。 (2) 观察记录贵阳地区禽白血病病例的大体组织病变，并收集 不同病例的组织样本 进行 H.E 染色和病理组织学观察，以明确贵阳地区禽白血病类型。 (3) 针对禽白血病病毒群特异性保守序列 P27 基因设计引物，对采集自 13 个养鸡场 96 份肝组织样本进行 PCR 检测，并随机选取 2 个 PCR 产物进行克隆测序分析。 (4) 针对禽白血病病毒 LTR 序列和 gp85 基因设计引物，对经群特异性引物扩增为 阳性的组织病料样本进行 PCR 检测，以明确贵阳地区存在的禽白血病病毒亚群。 [结果] (1) 本研究共采集贵阳地区13个养鸡场15个鸡群共计481份鸡血清样本，检测结果显 示鸡群ALV抗体阳性率为11.43%(55/481)，其中有9个鸡群172份血清样本检出A或B亚群 病毒抗体，抗体阳性率为18.60%(32/172)；有13个鸡群309份血清样本检出J亚群病毒抗 体，阳性率为7.44%(23/309)。 (2) 经大体病理学和组织病理学观察证实，在发生禽白血病的7例疑似病例鸡群中， 有3例为J亚群病毒引起的骨髓细胞瘤型白血病，2例为A亚群病毒引起的血管瘤型白血 病，另2例为A亚群病毒引起的淋巴细胞性白血病。 (3) 采用群特异性引物对采自13个鸡场96份鸡肝脏病料样本进行PCR检测，结果禽 白血病病毒核酸的检出率为78.12%(75/96)；随机选取2份PCR产物进行克隆测序分析， 两者间同源性为98.5%，与SD0501和NX0101株相应片段同源性为97.6%与99.2%。 (4) 采用LTR引物对75份经群特异性引物扩增为阳性的鸡肝脏病料样本进行外源性 禽白血病病毒的检测，结果检出率为86.67%(65/75)；随机选取4份PCR产物进行克隆测 序分析，测序结果与与ALV-J、A、B、C、D和E亚群参考毒株相应序列的同源性分别为 96.2~97.2%、88.3~90.1