汉黄芩素、咖啡酸乙酯及盐酸硫利达嗪抗肿瘤作用及机制研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中文摘要 1 英文摘要 5 第一部分 汉黄芩素及咖啡酸乙酯诱导肿瘤细胞凋亡及其作用机制研究 前 言 8 材料与方法 10 结 果 22 讨 论 37 结 论 42 第二部分 基于基因表达谱筛选的药物盐酸硫利达嗪抗 K562 作用 前 言 43 材料与方法 45 结 果 48 讨 论 52 结 论 55 参考文献 56 综 述 60 参考文献 65 硕士研究生期间（拟）发表论文和参与科学研究项目 67 致 谢 68 学位论文原创性声明 69 学位论文知识产权权属声明69 关于学位论文使用授权的说明70 中英文对照词汇 英文缩写 FBS 英文全称 Fetal bovine serum 中文全称 胎牛血清 PBS Phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 mRNA Messenger RNA 信使 RNA DEPC Diethyl pyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 MTT Methyl thiazolyl tetrazolium 甲基噻唑基四唑 MTS Methyl tolyl sulfide 甲基甲苯基硫 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 DTT Dithiothreitol 二硫苏糖醇 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化酶 SDS SDS-polyacrlamide gel electrophoresis SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 TEMED Tetramethylet hylethylenediamine 四甲基乙二胺 Tris Tris-(hydroxymethyl)-aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 PMSF Phenylmethane sulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 OD Optical density 光密度 FCM Flow cytometry 流式细胞术 PI Propidium iodide 碘化丙啶 DAPI 4,6-diamidino-2-phenylindole 4,6-二脒基-2-苯基吲哚 μM Micromolar per liter 微摩尔/升 IAP Inhibitors of apoptosis proteins 凋亡抑制蛋白 PARP Poly-ADP-ribos polymerase 多聚 ADP-核糖聚合酶 HDAC Histone deacetylase 组蛋白去乙酰化酶 Skp2 S-phase kinase-associated protein 2 S 相激酶相关蛋白 2 CML Chronic myelogenous leukemia 慢性粒细胞性白血病 广州医 广州医科大学硕士学位论文 汉黄芩素、咖啡酸乙酯及盐酸硫利达嗪抗肿瘤作用及机制研究 汉黄芩素、咖啡酸乙酯及盐酸硫利达嗪 抗肿瘤作用及机制研究 专业名称： 生物化学与分子生物学 研 究 生： 钟育健 导 师： 王晓华 教授 摘 要 第一部分 汉黄芩素及咖啡酸乙酯诱导肿瘤细胞凋亡及其作用机制研究 目的 为寻找有效的抗肿瘤药物，使用 HepG2、A549、K562 和 MCF7 作为实验细 胞，分别对筛选获得的汉黄芩素和咖啡酸乙酯进行抗肿瘤作用分析，并对它们诱 导肿瘤细胞凋亡的机制与 HDAC1/HADC2、c-Myc/Skp2/Fbw7α 通路之间的关系 进行探讨，同时初步研究咖啡酸乙酯抑制裸鼠体内 K562 移植瘤的作用。 主要研究方法和结果 一、汉黄芩素诱导 HepG2 和 A549 凋亡及其机制 1. MTT 结果显示，不同浓度（20μg?mL-1~70μg?mL-1，48 h）汉黄芩素处理 HepG2 和 A549，细胞活力呈剂量依赖性下降，对应 IC50 值分别为 45μg?mL-1 和 35μg? mL-1；倒置显微镜观察普通培养和 HE 染色结果显示，HepG2(45 μg?mL-1，48 h) 细胞变圆，皱缩，失去微绒毛，与邻近细胞分离；DAPI 荧光检测结果显示，HepG2 (45 μg?mL-1，48 h)和 A549 (35 μg?mL-1，48 h)细胞核均出现典型凋亡小体；流式 细胞术进行 Annexin V-PI 双染的凋亡分析结果表明，HepG2 和 A549 经不同浓度 汉黄芩素处理，均呈剂量依赖性促进细胞凋亡；细胞周期检测结果显示，汉黄芩 素主要将 HepG2 细胞阻滞在 G2/M 期。 2. Western blot 检测蛋白表达结果显示，汉黄芩素（25μg?mL-1，35μg?mL-1，45μg ?m