贵州苗族腌汤对急性肝衰竭大鼠肠源性内毒素血症的作用-内科学(感染病学)专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2014 届硕士研究生毕业论文 PAGE PAGE 10 贵州苗族腌汤对急性肝衰竭大鼠肠源性内毒素血症的作用 内科学（感染病学） 研究生：刘天昭 导 师：吴亚云 摘要 目的：探讨贵州苗族腌汤对急性肝衰竭大鼠肠源性内毒素血症的影响，为急性肝 衰竭患者的食疗提供理论支持。 方法：50 只雄性 SD 大鼠被随机分为正常对照组、急性肝衰竭模型组、双歧三联 活菌组、腌汤组、泡菜汤组，每组 10 只。除正常组及模型组外，其余 3 组均分 别予双歧三联活菌、腌汤、泡菜汤每日灌胃 2 次，连续 7 天。除正常组外，实验 的第 5 天，每组按 300mg/Kg 予硫代乙酰胺(TAA)皮下注射,连续 2 次（0、24 小 时）构建大鼠急性肝衰竭模型。实验的第 7 天处死大鼠，留取心血，分别检测丙 氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶 （aspartate aminotransferase, AST）、白细胞介素-1β（interleukin-1beta， IL-1β）及白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）；取距回盲部 3cm 回肠组织 及右叶肝组织行病理组织学检查，免疫组化法检测肝组织 CD14 及肠组织紧密连 接蛋白 claudin1 的表达。 结果：正常对照组肝组织结构正常；模型组肝细胞灶状坏死及大片坏死，肝细胞 索排列紊乱，大量炎细胞浸润，肝小叶结构破坏；双歧三联活菌组、腌汤组、泡 菜汤组肝组织损伤较重，光镜下无法与模型组损伤程度比较。正常对照组回肠粘 膜上皮细胞完整，绒毛整齐；模型组肠粘膜上皮细胞明显缺失，结构紊乱，固有 层明显充血，绒毛稀疏，大量炎细胞浸润；干预组肠粘膜损伤均较模型组轻，腌 汤组及双歧三联活菌组仅少许上皮细胞缺失，绒毛较稀疏，少量炎细胞浸润；泡 菜汤组上皮细胞亦缺失较明显。模型组及干预组大鼠血清转氨酶、IL-1β、IL-6 水平均较正常对照组高（P0.01），干预组大鼠上述指标均较模型组低，跟模型 组比较，腌汤组及双歧三联活菌组差异有统计学意义（P0.05），泡菜汤组差异 无统计学意义（P0.05）；跟双歧三联活菌组比较，腌汤组差异无统计学意义 （P0.05），泡菜汤组有明显差异（P0.05）。免疫组化显示正常对照组肝组织 库普弗细胞表面可见 CD14 蛋白微量表达，模型组肝组织 CD14 蛋白表达明显增多； 干预组肝组织 CD14 蛋白表达较模型组低，跟模型组比较，腌汤组及双歧三联活 菌组差异有统计学意义（P0.05），泡菜汤组差异无统计学意义（P0.05）；跟 双歧三联活菌组比较，腌汤组差异无统计学意义（P0.05），泡菜汤组有明显差 异（P0.05）。正常对照组肠粘膜 claudin-1 蛋白大量表达，在肠上皮细胞连接 处的顶端均匀一致地分布，模型组肠粘膜 claudin-1 蛋白表达明显减少，为非连 续性分布；干预组肠粘膜 claudin-1 蛋白表达较模型组高，跟模型组比较，腌汤 组及双歧三联活菌组差异有统计学意义（P0.05），泡菜汤组差异无统计学意义 （P0.05）；跟双歧三联活菌组比较，腌汤组差异无统计学意义（P0.05），泡 菜汤组有明显差异（P0.05）。 结论：贵州苗族腌汤能保护急性肝衰竭大鼠肠粘膜屏障，减少血清IL-1β、IL- 6的生成及释放，下调肝组织库普弗细胞CD14表达，减轻肝组织炎症，可应用于 肝衰竭的食疗。 关键词：苗族腌汤，急性肝衰竭，肠粘膜屏障， 炎症介质，CD14 前言 目前急性肝衰竭与肠源性内毒素血症(intestinalendotoxemia，IETM)的关 系日益引起重视，有资料表明重型肝炎内毒素血症的发生率高达93.3%[1]。各种 损肝因素(肝炎病毒、毒物、乙醇、药物等)通过各自的特异性发病机制造成“原 发性肝损伤”。肝衰竭发生发展过程中肠道屏障功能障碍，大量细菌和内毒素由 门静脉和淋巴管直接入侵，导致肠道细菌及毒素易位，同时因肝枯否细胞吞噬功 能受损，补体免疫调节作用减弱，难以有效清除来自门静脉的细菌和其代谢产物 内毒素，出现肠源性内毒素血症。内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁的重要成分， 主要化学成分为脂多糖（lipopolysaccharide ，LPS），LPS与LBP形成LPS-LBP 复合物，结合到肝枯否细胞CD14上, 然后与细胞膜上的（Toll-like receptor 4， TLR-4）结合，将活化信号传导至细胞内，触发单核-巨噬细胞活化并分泌TNF-α、 IL-1、IL-6 等炎性介质[2]，清除内毒素的同时，细胞因子与内毒素互相激活， 出现瀑布效应，引起肝微循环障碍，加剧肝细胞免疫损伤，导致肝细胞凋亡、坏 死，形成“继发性肝损伤”，进一步加剧