果蔬灰霉病的抗药性检测及其生防菌的分离-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

曲阜师范大学 曲阜师范大学 2011 级研究生毕业论文 万方数据 万方数据 摘 要 灰霉病是全世界普遍发生的病害，严重威胁果蔬作物的生长。目前灰霉病的防治以化 学防治为主，生物防治、农业防治为辅。灰霉病在中国普遍发生，严重影响果蔬作物的产 量和质量。 本实验为了检测山东省果蔬灰霉病的抗药性，从省内 10 个地市，不同的保护地采集 灰霉样本 150 余份，经过室内分离，得到灰霉菌株 130 株。研究了其对化学杀菌剂多菌灵、 腐霉利、乙霉威、嘧霉胺、咯菌腈的抗药性水平及类型。分离到针对灰霉病菌的生防菌 36 株，其中 2 株抑菌效果较好的菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。 将从灰霉病株分离得到的病原菌进行了形态学和分子生物学研究。灰霉病原分生孢子 梗直立、丛生、褐色或者淡褐色、光滑，顶端有 1~2 次分枝，分枝末端膨大，上面簇生大 量的分生孢子（单胞、卵圆形或近圆形、无色或灰色）。经鉴定，该灰霉病菌为灰葡萄孢 菌（Botrytis cinerea）。 将分离鉴定得到的130株灰葡萄孢菌，进行抗性频率的测定。对多菌灵（10μg/mL）， 腐霉利（5μg/mL），乙霉威（1μg/mL），嘧霉胺（5μg/mL），咯菌腈（0.5μg/mL）五种 化学杀菌剂的测定结果表明，多菌灵的抗性菌株共有121株，占93.08%；腐霉利抗性菌株 88株，占67.69%；乙霉威抗性菌株109株，占83.85%；嘧霉胺抗性菌株117株，占90%；咯 菌腈抗性菌株73株，占56.15%。 将分离鉴定得到的130株灰葡萄孢菌，进行抗药性水平测定。结果表明，多菌灵平均 EC50为439.16μg/mL，中抗菌株占65.5%，高抗菌株占31.03%。腐霉利平均EC50为4.03μg/mL， 低抗菌株占52.38%，中抗菌株为19.048%，高抗菌株为0%。乙霉威平均EC50为15.76μg/mL， 低抗菌株为68.09%，中抗菌株为4.255%，高抗菌株为10.638%。嘧霉胺平均EC50为 17.19μg/mL，低抗菌株为70.21%，中抗菌株为21.277%，高抗菌株为8.511%。咯菌腈平均 EC50为0.0367μg/mL，低抗菌株为58.33%，未发现中抗和高抗菌株。由此可以看出，用药 久、用量大的多菌灵、腐霉利和乙霉威杀菌剂，灰葡萄孢对其抗药性已经达到中抗甚至高 抗水平，而近几年使用的嘧霉胺、咯菌腈杀菌剂，灰葡萄孢的抗药性大部分处于低抗水平。 通过平板对峙法测定，发现2株生防菌枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌对灰霉病菌有 较强的抑菌效果。解淀粉芽孢杆菌抑制率达到91.25%，枯草芽孢杆菌抑制率为76.52%。 关键词：灰霉病；化学杀菌剂；抗药性；生防菌 2 Abstract As a worldwide disease, Botrytis cinerea poses a serious threat to the growth of vegetable crops. Currently, the main controlling method of the Botrytis cinerea is chemical control, and biological control is served as a supplement. In the mean time, agricultural control also plays a preventive effect. Shandong protected cultivation area are 4×105 hectares, accounting for about 40% of the whole nation, but due to the widespread occurrence of gray mold , it has a serious impact on the yield and quality of fruit and vegetable crops , which exerts an unpredictable effect on the agricultural income. In this study, in order to monitor resistance of Botrytis cinerea in Shandong province, gray mold samples are collected from the 10 cities of different protective area in Shandong province. Through the sterile separation in the laboratory, 130 strains