过表达TIPE2基因诱导大鼠心脏移植免疫耐受-胸心血管外科学专业论文.docxVIP

过表达 TI 过表达 TIPE2 基因诱导大鼠心脏移植免疫耐受 中文摘要 中文摘要过表达 T 中文摘要 过表达 TIPE2 基因诱导大鼠心脏移植免疫耐受 I I PAGE PAGE IV 过表达 TIPE2 基因诱导大鼠心脏移植免疫耐受 中文摘要 目的：构建一株能稳定过表达 TIPE2（Tumor necrosis factor-α-induced protein-8 like-2,TNFAIP8L2）基因的重组腺病毒。使用重组腺病毒过表达 TIPE2 基因预处理大 鼠同种异体心脏腹腔异位移植的模型(OnO,s 模型)，研究过表达 TIPE2 基因能否影响 受体自身免疫调节和移植免疫排斥反应，并探索该基因诱导受体大鼠产生免疫耐受的 可能性以及其具体作用机理。 方法：将 TIPE2 基因的 CDS 区装载于人工合成的重组腺病毒载体 AdC68 上，包 装成能在体内、外稳定地过表达 TIPE2 蛋白的重组腺病毒。分别将供体和受体大鼠随 机分成五组：A 组（空白组）：仅行 Wistar 大鼠到 SD 大鼠腹腔异位心脏移植术，手 术成功后不作任何处理；B 组（FK506 处理组）：行 Wistar 大鼠到 SD 大鼠腹腔异位 心脏移植，手术成功后连续给免疫抑制剂 FK506 0.5mg/Kg.d；C 组（重组腺病毒处理 组）：行 Wistar 大鼠到 SD 大鼠腹腔异位心脏移植，手术成功后尾静脉注入 1×1011VPs 重组腺病毒；D 组（FK506 联合重组腺病毒处理组）：行 Wistar 大鼠到 SD 大鼠腹腔 异位心脏移植，手术成功后连续给半量免疫抑制剂 FK506 0.25mg/Kg.d ，同时经尾 静脉注入 1×1011VPs 重组腺病毒；E 组（非相关重组腺病毒处理组）：行 Wistar 大鼠 到 SD 大鼠腹腔异位心脏移植，手术成功后经尾静脉注入 1×1011VPs 非相关重组腺病 毒；检测指标：供心的存活时间及其病理变化；分别移植成功后第 7 天检测各组移植 受体大鼠外周血单个核细胞中 CD4+CD25+ Treg 细胞百分比；外周血中 TNF-α、IFN-γ、 IL-2、IL-4、IL-10 等细胞因子浓度的变化；蛋白印迹法检测脾组织、下腹部引流淋巴 结中 TIPE2 蛋白的表达率以及 real-time PCR 法检测下腹部引流淋巴结中 FoxP3 的 mRNA 表达情况。 结果：（1）TIPE2 基因 CDS 区成功构建至人工合成的重组腺病毒载体 AdC68 上， 并且能在体内、外稳定过表达 TIPE2 蛋白。（2）平均存活时间（MST）：A 组： 9±1.6 天；B 组：26.3±3.8 天；C 组：33.4±3.5 天；D 组：48±6.6 天；E 组：28.8±6.1 天。与 A 组相比，B、C、D、E 组受体大鼠的供心存活时间明显延长， P 均＜0.05，数据有 统计学差异；与 B 组相比，C 组受体大鼠供心平均存活时间明显延长，P＜0.05，数 据有统计学差异；与 A、B、C、E 组相比，D 组受体大鼠供心存活时间明显延长，P 均＜0.05；数据有统计学意义；B 与 E 相比，受体大鼠供心存活时间无明显延长， P0.05，数据无统计学差异。 （3）受体外周血单个核细胞中 CD4+CD25+Treg 细胞 比例检测结果：A 组：1.70±0.66%；B 组：6.42±1.17%；C 组：9.38±1.13%；D 组： 31.34±2.23；E 组：1.70±0.72%；与 A、B、C、E 组相比，D 组 CD4+CD25+Treg 细胞 比例显著增高，P＜0.05，结果有统计学意义；与 B 组相比，C 组 CD4+CD25+Treg 细 胞比例显著增高，P＜0.05；数据有统计学差异，与 A 组相比，B、C、D 组 CD4+CD25+Treg 细胞比例均明显增高，P＜0.05，结果均有统计学差异；(4)外周血 IL-2（pg/ml）:A 组:2007.32±464.67;B 组:1142.64±83.09；C 组：735.59±194.55；D 组：515.38±50.60； E 组：915.76±180.60。A、B、E 组相比，D 组受体大鼠外周血中 IL-2 表达量明显降 低，P0.05，数据有统计学意义；C 组受体大鼠外周血中 IL-2 表达量较 B 组明显降低， P0.05，数据有统计学差异；B、C、D、E 组受体大鼠外周血中 IL-2 表达量较 A 组 明显降低，P0.05，数据有统计学意义；B 与 C 相比，受体大鼠外周血中 IL-2 表达 量有明显差异，P0.05，数据有统计学意义；D 与 C 相比，IL-2 表达量无明显差异， P ＞ 0.05 ， 数 据 无 统 计 学 差