第十二章 血痕检验.pptVIP

五、血痕的性别鉴定 判定血痕性别可检查X和Y染色质，也可测定性激素，或用DNA分析。前两种方法难免有误判，而后一种方法结果可靠。 DNA分析包括：Y染色体特异性探针杂交技术、Y染色体特异性酶切片段、PCR扩增Y染色体特异性片段、PCR扩增X、Y染色体特异性片段等。目前主要采用同时扩增X、Y两条染色体的特异性片段、Y染色体特异性片段。 (一)牙釉基因(amelogenin，AMG) 牙釉基因位于X染色体Xp22，编码牙原基质牙釉质蛋白，故名牙釉基因。用一对特异性引物可同时扩增AMG和AMGL序列片段，X特异性片段长977bp，Y特异性片段长788bp。 引物： 　　AMXY-1F 5-CTG ATG CTT GGC CTC AAG CCT GTG-3 　 AMXY-2F 5-TAA AGA GAT TCA TTA ACT TGA CTG-3 (二)Zw／ZFX基因 ZFY基因位于Y染色体短臂，它编码一种锌指状蛋白；ZFX基因位于X染色体上，与ZFY基因有同源序列。设计三个引物同时扩增Y染色体及X染色体特异性的ZFY基因和ZFX基因的 DNA片段来确定性别。位于Y染色体的ZFY基因片段长340bp，位于X染色体的ZFX基因片段长488bp。因此女性只有一条488bp的谱带，男性有340bp和488bp两条谱带。 (三)扩增Y染色体特异DNA片段 针对Y染色体特异性片段设计的鉴定性别的引物有数对。由于为Y染色体特有，必须同时扩增男女共有的片段作为对照，故常用人类Alu片段作对照。 Alu片段长度为130bp，扩增结果：男性具有Y染色体特异扩增条带和Alu带；女性只有Alu带；无Alu带为扩增失败。 常用的Y染色体特异DNA片段有DYZl。DYZl序列是Y染色体长臂异染色质区3.4kb的重复序列，在Y染色体上拷贝数为5 000。 六、血痕的其他检验 (一)出血部位的判定 鼻出血时可见纤毛柱状上皮细胞，偶见鼻毛；口腔出血可见扁平上皮细胞，有时可见食物残渣；肺出血可见纤毛柱状上皮细胞及口腔扁平上皮细胞；胃出血可见食物残渣、胃粘膜及口腔上皮细胞；内脏损伤出血含有脏器及组织碎片，镜检时可见脏器特有的细胞； 六、血痕的其他检验 (一)出血部位的判定 阴道出血可见阴道上皮细胞，偶见阴道滴虫、包皮垢干菌；月经血可见子宫内膜细胞、阴道或宫颈鳞状上皮细胞。因女性生殖器出血也可见这些细胞，故判断是否月经血常需用其他方法证明，如检验纤维蛋白降解产物及纤溶酶活性等。 (二)出血量的测定 1.重量计算　剪取含血检材与无血检材各一块，大小相等。室温干燥后，再放人干燥器内，使呈恒量，准确称量每块的重量，两者相差即是干血量。由于鲜血变为干血的重量比率是1 000：211，则血量计算公式为：血量＝干血量×l 000／211。计算血痕的总面积为剪下血痕面积的多少倍，则总出血量＝血量×倍数。 2．分光光度计测定法　 (三)出血时间的测定 血痕的陈旧度测定在某些案件中也很有意义。测定血痕陈旧度主要根据各种血液成分的变性和血清氯渗润基质的宽度，受时间推移的影响及其他因素，如热、阳光、水洗、腐败等的影响，一般只能作粗略估计。 第十二章　血痕检验 血痕检验需要解决的问题 送检检材是否是血痕 。 如果是血痕，是人血还是动物血 。 若是人血，则测定遗传标记进行个人识别 同时进行其他诸如出血量、出血时间及出血部位推断等问题。 四、DNA检验 (一)根据Alu序列作种属鉴定 哺乳类动物细胞DNA有一种中度重复序列，重复单位长约300bp。其中在170bp附近有限制性内切酶Alu切割的AGCT序列，命名为“Alu’家族。Alu序列为人和灵长类所特有，具有种属特异性。对血痕检材用PCR扩增Alu家族进行检测，可作为种属鉴定。 引物序列： 　Alu 9.1 　5-GGC ACT TTG GGA GGC CAA GG-3’ Alu 9.2 　5-TAC AAG CTT GTG CCA CCA TGC 　　　　　　　　CCA AC-3’ 　扩增产物在2％琼脂糖凝胶中电泳，可获得DNA长度为130bp的特异性条带。牛、大鼠、蛙、鲫鱼等的扩增片段大于130bp，且扩增产量非常少。除猴血外，其他动物均无扩增产物。 (二)根据28SrRNA序列鉴定种属 人类rRNA由60s和40s大小的两个亚基构成，其中60s又由28s、5.8s和5s三个亚基组成。大部分28s rRNA编码序列的区域进化缓慢，相对保守，但保守区中的可变区进化较快，种属之间差异较大。针对这一区域进行PCR扩增，可获得人和动物有差异的特异性片段。 引物A：5’一ATC TAG TAG CTG GTT CCC TC-3 引物B：5-CCT C