固相合成睡眠肽及成骨生长肽的研究-化学工艺专业论文.docxVIP

STUDY ON SOLID-PHASE SYNTHESIS OF SLEEPING PEPTIDE AND OSTEOGENIC GROWTH PEPTIDE A Dissertation submitted in fulfillment of the requirements of the degree of MASTER OF TECHNOLOGY from Shandong University of Science and Technology by Sun Yuanjun Supervisor: Professor Wang Jianing College of Chemical and Environmental Engineering May 2008 声 明 本人呈交给山东科技大学的这篇硕士学位论文，除了所列参考文献和世所 公认的文献外，全部是本人在导师指导下的研究成果。该论文资料尚没有呈交 于其它任何学术机关作鉴定。 硕士生签名： 日 期： AFFIRMATION I declare that this dissertation, submitted in fulfillment of the requirements for the award of Master of Philosophy in Shandong University of Science and Technology, is wholly my own work unless referenced of acknowledge. The document has not been submitted for qualification at any other academic institute. Signature: Date: 山东科技大学硕士学位论文摘要 山东科技大学硕士学位论文 摘要 摘 要 本文首先对多肽的一些内容进行了简单介绍，包括多肽的概念、多肽的合成发展史、 多肽的各种制备方法、基本原理、国内外研究现状、及其分析纯化方法和研究意义。主 要研究了睡眠肽和成骨生长肽的 Fmoc 法固相合成及分离纯化，固相合成中系统地研究 了树脂类型、保护基、缩合时间、反应溶剂、缩合剂、偶连率的测定方法和树脂切割条 件对合成质量的影响，确立了最佳的工艺条件为：以 DMF 为反应溶剂，TBTU 为缩合剂 ， TFA：对甲基苯酚：EDT：水为 97：0.25：0.25：2.5(V/V)的切割液配制条件，3 倍过量 投料进行缩合反应，反应时间为 3hr。此反应条件能够成功的合成睡眠肽和成骨生长肽。 通过对睡眠肽和成骨生长肽的分离纯化研究，确立了纯化工艺为：先用凝胶色谱柱纯化， 纯化后产品的纯度提高到 60%，再以反相高效液相制备层析进行最终纯化，最终纯化结 果纯度达到 95%以上。 此外，本文的其中一个目的是在原睡眠肽序列的基础上，引入了一段氨基酸序列， 希望能够具有增强其穿透细胞膜作用，并进行了其生物活性测试。但是从测试结果看， 没有明显的效果，成骨生长肽的穿膜活性实验因为时间有限，没有来得及做，下一步将 继续测试其穿膜活性。论述了在合成这段序列过程中遇到的问题，并对其进行了分析， 对后面的工作提出了一些建议。 关键词：固相合成，睡眠肽，成骨生长肽，凝胶色谱，反相高效液相层析 Abstract Some contents of peptide was simply mentioned at the front part of the thesis, including peptide’s concept, synthesis’s history, kinds methods of synthesis, basic principle, the modern conditions of domestic country and foreign country, methods of analysis and purification, and its research significance. Solid-Phase Synthesis and purification of sleeping peptide and osteogenic growth peptide were studied in this thesis. Through systemically studying the effects of resin type ， coupling time, coupling solvents, coupling reagents and cleavage conditions on the yield of sl