海水浸泡脊髓损伤病理变化的实验研究-外科学(骨外)专业论文.docxVIP

3 . 5 T U N E L 法检测结果 2 4 4 讨论27 5 结论29 参考文献29 附录31 致谢3 2 综述33 4 安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 - - PAGE 1 - 缩略词表 英文缩写 SCI 英文全称 spinal cord injury 中文全称 脊髓损伤 HE hematoxylin and eosin 苏木精-伊红 Bcl-2 B-cell lymphoma/leukemia-2 B 细胞淋巴瘤/白血病-2 Bax Bcl-2 Assaciated X protein Bcl-2 相关 x 蛋白 TUNEL TdT-Mediated dUTP HYPERLINK /nick/ nick HYPERLINK /end/ end labeling 原位末端标记法 海水浸泡脊髓损伤病理变化的实验研究 摘 要 背景：未来战争已逐渐从内陆扩展到广阔的海洋，在海战中，伤员易坠海，常致 不同程度的海水浸泡，海水具有低温、高渗、低碱性的特点，并含有大量特殊的 海生致病微生物。海战时伤员落水浸泡于海水中，加重了原有的损伤。大宗战伤 资料表明，海战中休克发生率为陆战时的2倍，死亡率为陆战时的5～10倍。我国 海岸线广袤，拥有丰富的海洋资源需要去维护，特别是我国的南海，发生海战， 出现战伤海水浸泡不可避免。目前国内对海水浸泡对颅脑、腹腔、胸腔、四肢骨 折已开始研究，并已取得初步结果。但开放性脊髓损伤受到海水浸泡，是否影响 创伤后脊髓的继发性损伤，这方面的文献报道极少。本课题旨在建立海水浸泡脊 髓损伤家兔模型的基础上，观察了海水浸泡对脊髓损伤后神经功能、病理变化， 从不同水平与不同角度探讨海水浸泡加重脊髓继发性损伤的可能机制，为临床上 海水浸泡脊髓损伤的处理提供理论依据，指导海战伤早期的综合救治。 目的：通过建立海水浸泡兔脊髓损伤动物模型，观察脊髓损伤海水浸泡后动物神 经功能改变、脊髓病理形态改变及神经细胞 Bcl－2、Bax 凋亡蛋白表达情况，并 通过 TUNEL 法检测神经细胞凋亡，明确脊髓损伤海水浸泡后的特点，为海水浸泡 脊髓损伤救治提供一定的理论指导。 方法：采用改良 Allen`s 打击器造兔脊髓损伤模型，根据随机数字表，将 96 只大 耳白兔随机分为 4 组：A 组：正常组（仅切除椎板不损伤脊髓，n=6）；B 组：SCI 组（切除椎板并造脊髓损伤模型，但不浸泡，n=30）；C 组：SCINS 组（切除椎板 并造脊髓损伤模型，生理盐水浸泡 60min，n=30）；D 组：SCISW 组（切除椎板并 造脊髓损伤模型，海水浸泡 60min，n=30）。除 A 组外，后三组分别根据处理后 1h、 6h、12h、24h、48h 五个时间点分为五组，每时间点 6 只，在各时间点进行神经功 能评分（Tarlov 评分），并取伤段脊髓，光镜下观察伤段脊髓组织病理形态，免疫 组织化学染色法检测 Bcl-2、Bax 的表达水平，采用 TUNEL 法检测脊髓神经细胞 凋亡情况。 结果：除 A 组，余组动物 Tarlov 评分均明显降低，1h 时间点三组评分差异不明显， 6h 时间点动物 Tarlov 评分 D 组明显高于 B、C 两组，但 12h 后 D 组评分又明显下 降低于 B、C 组，差异均有统计学意义。B、C、D 三组伤后均出现创伤性脊髓水 肿的病理改变，但水肿高峰出现不一致，B、C 组在干预结束后 6h 即出现了明显 创伤性水肿改变，干预结束后 12h 依旧；而 D 组在干预结束后 12h 出现明显创伤 性水肿改变；B 组和 C 组两者水肿同一时间点差异不明显。免疫组织化学检测， Bcl-2 和 Bax 在 B、C、D 三组各时间点均有阳性表达，但 D 组和 B、C 两组在各 时间点表达强度有差异（P0.05），B、C 两组在各时间点 Bcl-2 和 Bax 表达强度差 异不明显。D 组 Bcl-2 表达强度低于 B、C 两组，Bax 表达强度在损伤 6h 后强于 B、 C 两组，之前则弱于两组。TUNEL 法检查发现 6h 时间点阳性细胞数，D 组明显低 于 B、C 组；但 12h 时间点阳性细胞明显增多，高峰值明显大于 B、C 组，后又明 显下降，低于 B、C 两组（P＜0.01）。 结论：海水浸泡早期有抑制脊髓损伤加重的表现，延迟了创伤性脊髓损伤后各种 病理改变及细胞凋亡的出现，但最终发生的脊髓损害较无海水浸泡的对照组明显 加重，具有促进神经细胞凋亡发生的作用。 关键词：脊髓损伤 海水浸泡 细胞凋亡 病理变化 凋亡蛋白 Study on pathological changes of spinal cord injury with seawater immersion Abstract Context