广金钱草种质资源评价与遗传多样性分析-中药学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 湖北中医药大学学位论文原创性声明 本人声明： 所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包 含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中 医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡 献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明 的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 年 月 日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解湖北中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即： 学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位 论文的全部或部份内容，可以采用复印、缩印或其他手段保留学位论文； 学校可以根据国家或湖北省有关部门的规定送交学位论文。同意《中国优 秀博硕士论文全文数据库出版章程》的内容。同意授权中国科学技术信息 研究所将本人学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。 （必威体育官网网址论文在解密后遵守此规定） 论文作者签名： 导师签名： 年 月 日 万方数据 万方数据 目 录 摘 要 Ⅰ Abstract Ⅲ 缩略词表 Ⅵ 前 言 1 第一章 广金钱草的种植生产情况 2 1 广金钱草生态习性及生物学特性 2 1.1 生态习性 2 1.2 生物学特性 2 2 种植生产规模 3 第二章 一测多评法测定广金钱草五种黄酮苷类成分的含量 4 1 引言 4 2 实验材料及仪器试剂 4 2.1 实验材料 4 2.2 仪器与试剂 6 3 实验方法与结果 6 3.1 供试品溶液的制备 6 3.2 色谱条件 6 3.3 线性关系 7 3.4 精密度实验 9 3.5 重复性实验 10 3.6 稳定性试验11 3.7 加样回收试验 12 3.8 相对校正因子(fks)的确定 12 3.9 系统适用性考察 13 4 讨论 16 第三章 广金钱草药材指纹图谱及主成分分析 17 1 引言 17 2 实验材料与仪器试剂 17 2.1 实验材料 17 2.2 仪器与试剂 17 3 实验方法 19 3.1 色谱条件 19 3.2 对照品溶液的制备 19 3.3 供试品溶液的制备 19 3.4 方法学考察 19 3.5 指纹图谱的建立 20 4 结果 20 4.1 方法学考察结果 20 4.2 广金钱草 HPLC 指纹图谱建立 23 4.3 相似度分析 26 4.4 主成分分析 26 4.5 色谱峰 α 值-百分峰面积指纹特征分析 33 5 讨论 38 6 结论 39 第四章 广金钱草遗传多样性 ISSR 分析 40 1 引言 40 2 仪器与试剂 40 2.1 供试品材料 40 2.2 试剂 40 2.3 仪器 41 3 方法 41 3.1 广金钱草基因组 DNA 的提取与纯化 41 3.2 ISSR-PCR 反应体系选择与优化 42 3.3 ISSR-PCR 程序的建立与优化 43 3.4 ISSR 引物及退火温度的筛选 43 3.5 PCR 扩增 43 3.6 数据统计与分析 43 4 结果与分析 44 4.1 基因组 DNA 提取结果 44 4.2 最佳 PCR 反应体系 44 4.3 引物信息及扩增结果 44 4.4 广金钱草遗传分化水平 46 4.5 居群间遗传距离与聚类分析 46 5 讨论 49 结 语 50 参考文献 52 附录 1 文献综述 54 附录 2 攻读硕士学位期间发表的论文 64 致 谢 65 摘 要 广金钱草为豆科植物广金钱草 Desmodium styracifolium (Osb.) Merr. 的干燥地上部分[1]。《岭南采药录》中以“马蹄草”作为药材名载入，是一 种广泛使用的大宗中药材，根据文献的记载[2]，广金钱草主要生长、种植 分布于广东、广西、云南、海南等南方地区，在广东、广西又常被称为金 钱草、马蹄草、假花生等。广金钱草主要功效清热祛湿、利水通淋，且具 有排石的功效，常用于治疗泌尿系统结石、胆囊炎、胆结石等疾病[3]。 通过对广东省、广西壮族自治区广金钱草种植情况进行调查发现，广 东、广西两地均有大面积种植广金钱草的传统，形成相对稳定的栽培品种。 其中，通过人工培育，种植规模最大的地区是广西桂林市临桂县，年产量 达 2000 吨，为目前产量最大的广金钱草种植地。 运用 HPLC-UV 对广金钱草中五种黄酮类成分（夏佛塔苷、Vicenin 2、 Vicenin 3、异荭草素、异牡荆苷）的含量进行测定分析，所采集的广金钱 草样本所含的夏佛塔苷均高于药典标准，人工栽培的广金钱草所含的这五 种黄酮类成分均高于野生及半野生药材，且人工栽培的广金钱草质量较为 稳定容易控制。 采用