过氯酸铵对家兔肺组织致纤维化作用的研究-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 过氯酸铵对家兔肺组织致纤维化作用的研究 硕士 研究生 林明芳 指 导 教 师 彭开良 教授 摘 要 目的 本文采用实验动物模型，对家兔进行气管内反复注入过氯酸铵（AP）染毒， 观察其体重、脏器系数的变化；采用 RT-PCR 方法，研究分析过氯酸铵对家兔肺组织 转化生长因子-β1（TGF-β1）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA 表达的影响，探讨该 指标在过氯酸铵致肺纤维化中的佐证意义；并研究其肺组织的病理变化，以便为阐明 AP 的致肺纤维化作用提供科学依据。 方法 选用白色健康家兔 25 只, 随机分为 5 组，分别为 AP 低(22.5mg/kg)、中 (45mg/kg)、高(90mg/kg)剂量组、阴性对照组(生理盐水)和博来霉素阳性组(BLM A5， 4mg/只)，每组 5 只。每周一次气管内注入 AP 染毒并称其体重，共染毒 13 周。染毒 体积：AP 0.5ml/kg，博来霉素 1ml/只(4mg/只)，阴性对照组取等体积的生理盐水。染 毒后于第 23 周进行耳缘静脉采血并处死家兔，取心、肝、脾、肺、肾称量，计算其 脏器系数变化。取肺组织用 Trizol 试剂盒提取肺组织总 RNA。取 2μl RNA 进行逆转 录，反应体系为 25μl。再取逆转录产物进行 PCR 扩增，反应体系为 25μl。扩增产物 在 1.5%琼脂糖凝胶（含 0.05μl/ml Goldview）中电泳 30min，凝胶成像系统下扫描分 析，GAPDH 作为内对照，TGF-β1 和 TNF-αmRNA 相对含量用其吸光度×面积的值 与 GAPDH 相应值的比值来表示。同时，取肺组织做常规病理（HE）和胶原纤维与弹 力纤维(VG）病理切片，观察其变化。 结果 家兔经 AP 反复染毒至第 8 周和第 11、12 周，高剂量组和 BLM A5 组家兔体 重均比对照组明显下降（P＜0.05）。BLM A5 组肺脏器系数（5.05‰）比对照组、低、 中剂量组（3.32、3.94、3.58‰）升高显著（P＜0.05 或 P＜0.01）。染毒后至第 23 周， 其体重及脏器系数的变化差异无统计学意义。肺组织 TGF-β1 和 TNF-αmRNA 表达：AP 不同剂量染毒后，低、中、高各剂量组及博来霉素组的 TGF-β1（1.11±0.22,1.54± 0.18,1.84±0.10,2.36±0.85 ）和 TNF-αmRNA（1.10 ±0.24,1.26±0.11,1.87± 0.11,2.34±0.75）表达均比对照组（0.47±0.09,0.51±0.24）明显升高，其差异有 统计学意义（P0.05 或 P0.01）。肺组织病理显示：低剂量组肺间质较对照组明显 增厚，细胞显密集；中剂量组显示有大量炎性细胞浸润，并可见少量成纤维细胞；而 高剂量组则变化明显，除炎性细胞浸润外，可见肺间质结缔组织有弥漫性增生，并可 见明显的成纤维细胞及胶原纤维大量增生。 结论 过氯酸铵可引起肺组织损伤，具有一定的细胞毒作用。过氯酸铵可使家兔 肺组织 TGF-β1、TNF-αmRNA 表达增加，表明该细胞因子的增高性变化为提示过氯酸 铵的致肺纤维化作用具有佐证性意义。肺组织病理结果表明，较高剂量的过氯酸铵经 气管反复染毒，可导致肺纤维化。本研究为首次阐明过氯酸铵的致肺纤维化作用提供 了可靠的实验依据。 关键词 过氯酸铵；肺纤维化；转化生长因子-β1；肿瘤坏死因子-α Study On The Fibrosis Effect Of Ammonium Perchlorate To Lung Tissues Of Rabbits Master Candidate: Lin Mingfang Academic Advisor: Professor Peng Kailiang Abstract Objective:The purpose of this trial is to repeatly administrated Ammoniom perchlorate by intratracheal instillation to observe the body weight and organ coefficient changes of rabbits ,to study the pathological change. The mRNA level of transforming growth factor-β1 and tumor necrosis factor-αin the lung tissues was measured by RT-PCR, to furt