冠心舒通胶囊对细胞损伤保护作用研究中药学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 I I 冠心舒通胶囊对细胞损伤保护作用研究 摘 要 冠心病（CHD）是最常见的心脑血管疾病之一，具有患病率高、致残率高、死亡 率高等特点，已经成为危害人类健康的杀手之一。冠心病的治疗目前有药物治疗、介 入治疗和冠脉搭桥，其中以药物治疗最为重要。既往结果调查显示，超过 70%的冠心 病患者长期使用中成药治疗。但是中药复方制剂的有效物质基础研究相对薄弱，作用 机制不清楚，已经成为制约中药现代化和国际化进程的技术瓶颈，迫切需要深入研究。 基于此，“冠心舒通胶囊治疗冠心病、心绞痛的作用机理研究”被列入国家“十二五重 大新药创制”科技重大专项（ 2011ZX09401-308-6），本课题研究内容为国家课题任务 的一部分，以治疗心脑血管疾病的中药复方药冠心舒通胶囊及其各单味药为研究对象， 采用现代分子生物学和药剂学的研究手段，获得中药复方作用机理的实验研究数据和 科学证据，证实祖国传统医药学理论的科学内涵，实现中药现代化和国际化的目标。 冠状动脉粥样硬化（AS）是 CHD 的一个最重要的病理特征。本课题应用 AS 的细 胞增殖学说，研究了冠心舒通胶囊及其各单味药对心肌细胞及胸主动脉平滑肌细胞 （ASMC）的细胞增殖的影响；基于 AS 的抗氧化应激理论，探讨了冠心舒通胶囊及其 各单味药对心肌细胞及 ASMC 缺氧复氧（H/R）损伤的保护作用机制研究；根据 AS 的内皮损伤原理，考察了冠心舒通胶囊内容物对内皮损伤的保护作用机制。选取的原 代培养细胞更能较为客观准确地反映药物在细胞水平上的作用，细胞刺激因子如血管 紧张素Ⅱ（AngⅡ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）都具有较好的靶向功能，AngⅡ能够 诱导心肌细胞和 ASMC 增殖，TNF-α 这一炎症因子可以造成内皮细胞损伤,一定程度 上反映了 AS 的病理过程。本文主要研究内容和研究结果如下： 1、冠心舒通胶囊及其各单味药对大鼠心肌细胞的保护作用研究。本研究应用酶消 化的方法原代培养心肌细胞，选取 MTT 比色法，考察 4 个药物浓度(0.01，0.05，0.10， 0.20 g·L-1）广枣提取物、丹参提取物、天竺黄水提物、天竺黄醇提物、冰片和胶囊内 容物 6 组药对 AngⅡ诱导的心肌细胞增殖的影响，结果表明冠心舒通胶囊及其各单味 陕西 陕西中医学院 2013 届硕士学位论文 II II 药均可不同程度地抑制 AngⅡ所致的心肌细胞增殖；取原代培养的乳鼠心肌细胞，建 立 H/R 细胞损伤模型，给药 24 h 后测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛(MDA)、 乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮合酶（NOS）、一氧化氮（NO）的含量，结果表明冠心 舒通胶囊及其各单味药均能提高缺氧心肌细胞 SOD 和 NOS 活性，增加 NO 含量，降 低 MDA 和 LDH 含量。 2、冠心舒通胶囊及其各单味药对平滑肌细胞的保护作用研究。本研究利用组织块 贴壁的方法原代培养 ASMC，选取 MTT 比色法，考察 4 个药物浓度(0.01，0.05，0.10， 0.20 g·L-1）广枣提取物、丹参提取物、天竺黄水提物、天竺黄醇提物、冰片和胶囊内 容物 6 组药对 AngⅡ诱导的 ASMC 增殖的影响, 结果表明冠心舒通胶囊及其各单味药 均可不同程度地抑制 AngⅡ所致的 ASMC 增殖，取 ASMC 建立 H/R 细胞损伤模型，给 药 24 h 后测定细胞内 SOD、MDA、LDH、NOS 的含量、结果表明冠心舒通胶囊及其 各单味药能提高缺氧 ASMC 的 SOD 和 NOS 活性，降低 MDA 和 LDH 含量。 3、冠心舒通胶囊对 TNF-α 所致的内皮细胞损伤的保护作用研究。本研究采用 MTT 比色法筛选 TNF-α 最佳刺激浓度，同时考察药物对 TNF-α 损伤的 ECV304 活性影响， 应用 PCR 法检测内皮细胞中 iNOS 和 eNOS mRNA 的含量，结果表明 5×10-6 g·L-1 的 TNF-α 对 ECV304 作用明显呈剂量依赖性，冠心舒通胶囊能提高 ECV304 细胞存活率， 同时可以提高 eNOS mRNA 表达含量，降低 iNOS mRNA 表达含量。 综上所述，冠心舒通胶囊及其各单味药提取物可以不同程度地抑制 AngⅡ诱导心 肌和平滑肌细胞增殖；对缺氧复氧损伤心肌和平滑肌细胞具有抗氧化应激作用，同时 能提高 NOS 活性作用从而发挥舒张血管功能；冠心舒通胶囊对 TNF-α 诱导所致的内皮 细胞损伤保护作用主要是通过提高细胞存活率，上调 eNOS mRNA 表达含量，下调 iNOS mRNA 表达含量实现的。 关 键 词：冠心舒通胶囊；冠心病；细胞损伤；保护作用 Abstr Abstract PAGE PAGE III Protec