冠脉药物涂层支架内迟发性血栓形成及VEGF干预的可能机制-内科学(心血管病)专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 缩略词表 英文缩写 英文名称 中文名称 VEC Vascular endothelial cell 血管内皮细胞 VSMC Vascular smooth muscle cell 血管平滑肌细胞 VEGF PTCA BMS DES ELISA PBS FITC PI Bcl-2 Vascular endothelial growth factor Percutaneous transluminal coronary angioplasty Bare metal stent Drug eluting stent Enzyme-linked immuno sorbent assay Phosphate buffer saline Fluorescein isothiocyanate Propidium iodide B-cell lymphoma-2 血管内皮生长因子 经皮冠状动脉腔内成形术 裸金属支架 药物涂层支架 酶联免疫吸附法 磷酸盐缓冲液 异硫氰酸荧光素 碘化丙锭 B 细胞淋巴瘤-2 基因 TBS Tris-hydrochloric acid buffer solution Tris-盐酸缓冲液 PVDF Polyvin ylidene Fluoride 磷脂酰肌醇 3 激酶 聚偏二氟乙烯 冠脉药物涂层支架内迟发性血栓形成及 VEGF 干预的可能机制 华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科 硕士研究生： 王万荣 导 师： 刘启功 摘 要 目的： 探讨冠状动脉药物涂层支架（DES）内迟发性血栓形成的机制及 VEGF 预防 迟发性血栓形成的可能机制。 方法： 将处于对数生长期的原代人脐静脉内皮细胞（VEC）及 SD 大鼠胸主动脉平 滑肌细胞（VSMC）均分为对照组（C）、低浓度紫杉醇组（Z1）、高浓度紫杉醇组（Z2）、 低浓度 VEGF+低浓度紫杉醇组（V1+Z1）、高浓度 VEGF+低浓度紫杉醇组（V2+Z1）、 低浓度雷帕霉素组（R1）、高浓度雷帕霉素组（R2）、低浓度 VEGF+低浓度雷帕霉素组 （V1+R1）、高浓度 VEGF+低浓度雷帕霉素组（V2+R1）。利用四氮唑盐比色法检测各组 VEC 与 VSMC 的增殖情况；通过化学法检测各组 VEC 上清液中 NO 的分泌情况；通 过 ELISA 法检测各组 VEC 上清液中 PGI2 的代谢产物 6-keto-PGF1a、ET-1、TXA2 的代 谢产物 TXB2、t-PA 和 PAI-1 的分泌情况；采用流式细胞术 Annexin V 和 PI 双染法观 察各组 VEC 与 VSMC 的凋亡情况；采用蛋白免疫印迹实验观察各组 VEC 与 VSMC 凋亡相关基因 Bcl-2 和 Apo-1/Fas 的蛋白质表达情况。 结果：紫杉醇和雷帕霉素组较对照组均可抑制 VEC 与 VSMC 的增殖（P＜0.05），加用 VEGF 组可以拮抗紫杉醇和雷帕霉素的对 VEC 的上述作用（P＜0.05），而对 VSMC 的 拮抗作用不明显（P0.05），加用 VEGF 的两组间也没有统计学意义（P0.05）。经化 学法和 ELISA 法检测，紫杉醇组及雷帕霉素组均可抑制 VEC 分泌 NO、6-keto-PGF1a 和 PAI-1（P＜0.05），而加用 VEGF 组可以拮抗紫杉醇和雷帕霉素的上述作用，使 VEC 分泌 NO、6-keto-PGF1a 和 PAI-1 增加（P＜0.05）；紫杉醇组及雷帕霉素组均可促进 VEC 分泌 t-PA、ET-1、TXB2（P﹤0.05），而加用 VEGF 组可以减少 VEC 分泌 t-PA、 ET-1（P﹤0.05），加有高浓度 VEGF 组也可以减少 VEC 分泌 TXB2（P﹤0.05），低 浓度 VEGF 组相比未加 VEGF 组，其分泌无明显差别（P0.05）。流式细胞术结果显 示紫杉醇和雷帕霉素均可以使 VEC 和 VSMC 的凋亡率增加，而 VEGF 可以拮抗紫杉 醇和雷帕霉素对 VEC 的上述作用（P﹤0.05），而对 VSMC 的上述作用无影响（P0.05）。 同时，Western blot 也显示紫杉醇和雷帕霉素可使 VEC 和 VSMC 凋亡相关基因 Bcl-2 的蛋白质表达下调、Apo-1/Fas 的蛋白质表达上调（P﹤0.05），VEGF 组能拮抗 VEC 的 上述作用（P﹤0.05），而对 VSMC 的上述作用无影响（P0.05）。 结论： 紫杉醇和雷帕霉素能抑制 VEC 与 VSMC 增殖，影响 VEC 的分泌功能，诱导 VEC 和 VSMC 凋亡，使凋亡相关基因 Bcl-2 的蛋白表达下调、Apo-1