贵州省蚋类携带住白细胞虫分子鉴定的初步研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 1 1 贵州省蚋类携带住白细胞虫分子鉴定的初步研究 专 业：生物化学与分子生物学 研究生：李江城 导 师：杨 明 教授 摘要 [摘要] 目的：利用遗传标记（线粒体 Cytb 基因的特定区域）的 DNA 序列， 通过生命数据条码系统（BOLDSYSTEMS， HYPERLINK / ）和系统发育 分析，鉴定贵州省蚋类携带的住白细胞虫种属。方法：（1）标本来源：选取贵州 省贵阳市、雷山县及三穗县共 3 个地区，利用车载式捕虫网采集蚋类雌虫标本； 每个地区设 3 个采集点。（2）标本处理：常规固定并形态学鉴定，解剖镜下切尾 器制片。（3）蚋类种属鉴定：提取 DNA，PCR 扩增蚋类 COI 基因并测序，利用 生命数据条码系统及系统发育分析方法，并结合形态学特征，鉴定种属。（4）住 白细胞虫的分子鉴定：提取 DNA，PCR 扩增住白细胞虫 Cytb 基因并测序，利用 生命数据条码系统及系统发育分析鉴定种属。结果：在上述贵州省 3 县市采获雌 蚋 212 只，获得其中 199 只的部分 COI 基因序列，经鉴定包括 1 属 4 亚属 12 种。 在 3 只雌蚋中 PCR 扩增得白细胞虫 Cytb 基因序列，经鉴定均为沙氏住白细胞虫 (Leucocytozoon sabrazesi)，其中一例的宿主蚋种为双齿蚋（Simulium bidentatum）， 另外两例的宿主蚋种为麻子绳蚋（S. asakoae）。结论：在贵州省双齿蚋及麻子绳 蚋中存在沙氏住白细胞虫寄生。 关键词：蚋科；DNA 条形码；住白细胞虫；BOLD；系统发育分析 1 前言 蚋类，俗称黑蝇（Black fly），隶属于昆虫纲（Insecta），双翅目(Diptera)， 蚋科(Simuliidae)， 是医学昆虫中一个呈世界分布的重要类群。它不但骚扰吸血， 而且是人类和禽畜多种疾病的传播媒介[1]。 蚋类属完全变态昆虫，分为卵、幼虫、蛹和成虫 4 个时期。蚋类生活史有 水生和陆生两个阶段，卵、幼虫和蛹统称水生期，成虫期即陆生期[2]。水生期的 蚋类不仅可以过滤水中微生物摄食而净化水质，本身还是鱼类的食物，而且在蚋 类 幼 虫 中 也 有 其 他 生 物 寄 生 ， 主 要 包 括 索 科 线 虫 （ Mermithidae ）、 孢 子 虫 （microspordia）和真菌（fungi），其中寄生率最高的是索科线虫[3]。而陆生期的 蚋类，是一种重要的吸血双翅目昆虫[4]。不仅吸血骚扰，导致家畜不能茁壮生长， 奶牛产奶量下降，甚至死亡，而且作为众多寄生虫的中间宿主，是众多疾病的传 播媒介给人类生活和生产造成很大的危害。比如旋盘尾丝虫（Onchocerca volvlus） 引起的人盘尾丝虫病（onchocerciasis），欧氏曼森线虫（Mansonella ozzardi）引 起的曼森丝虫病（Mansonelliasis），住白细胞虫(Leucocytozoon)引起的禽鸟住白 细胞虫病（Leucocytozoonsis）的，虫霉目真菌（Entomophthorales）引起的真菌 性皮肤病 [3,5,6]。 住白细胞虫隶属于原生动物门（Protozoa）、孢子虫纲 (Sporozoa)、血孢子虫 目(Hoemasporidia)、住白细胞虫属 (Leucocytozoon )[7]。Danilewsky (1889、1890) 首先描述了一种猫头鹰住白虫，称为Leucocytozaires。Berestneff (1904) 首先建立 了住白虫属Leucocytozoon，并把Ziemann (1898)描述的一种猫头鹰(Athenenoctua) 住白虫定名为Leucocytozoon danilewskyi (Fallis, 1977)。Hsu.c.k等报告在146种家 禽和鸟类宿主中共有67种住白虫[8]。FalliS认为已报告的74种住白虫中只有59种 是独立的种。其中较常见的有以下7种： 1. 斯氏住白虫 (火鸡) (L. smith Leneran luce, 1905) 2. 尼氏住白虫(珍珠鸡) (L. neavei Balfour, 1906) 卡氏住白虫(鸡) (L.caulleryi Mathis Leger, 1909) 沙氏住白虫(鸡) (L.sabrazesi Mathis Leger, 1909) 西氏住白虫(鸭) (L.simondi Mathis Leger, 1909) 鹅住白虫(鹅) (L.anseris Knuth Magdeburg, 1922) 7. 安氏住白虫(鸡) (L.andrewsi Atehley, 1951) [9] 目前国内外报道的病原