冠心病患者血浆microRNA表达谱的筛选及其临床意义研究-内科学专业论文.docxVIP

宁波 宁波大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 独 创 性 声 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及 取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中 不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得宁波大学或其他 教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做 的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。 若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。 签名： 日期： 关于论文使用授权的声明 本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部 或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 （必威体育官网网址的论文在解密后应遵循此规定） 签名： 导师签名： 日期： III 冠心病患者血浆microRNA表达谱的筛选及其临床意义研究 中文摘要 研 究背 景 冠心病（ CAD） 是一种 严 重 威 胁 人 类 健 康 的 疾 病 之 一 ， 且 发病 率 呈 逐年 上升趋势 ， 而 早 期 诊 断 和治疗 冠 心 病 能 有 效 降 低 其 死 亡 率 ； 但 目 前 尚 无 理 想 的 诊 断 冠 心 病 的 生 物 标 志 物 ， 因 此 发 展 一 种 新 的 、 有 更 高 的 敏 感 性 和 特 异 性 的 生 物 标志 物 具 有 重 要意 义 。 MicroRNA（miRNA） 是一 类 长 度 为 19~24 个 核 糖核 苷酸的非 编码内 源性 小单链 RNA 分子， 且在心血 管系统 高度 表达，几 乎参与 调 控 了 心 脏 所 有 的 病 理 生 理 过 程 ， 在 心 脏 的 正常 发育、 冠状 动 脉 粥 样 硬 化 、 心 肌 细胞 损伤 等 过 程 中 均 发 挥 着 重 要 作 用 。 近 年 来 研究 发现 血浆 中 miRNA 能 稳 定 存在，且 随疾病 发生 发展而表 达水平 发生 改变 ；因 此，血浆 miRNA 检 测可能 成 为冠心病 诊断和 治疗 的理想生 物标志 物；而目前这 方面的 研究 尚很少。 目的 : 本 研 究 的 目 的 是 筛 选 出 冠 心 病 患 者 血 浆 中 与 正 常 人 血 浆 相 比 存 在 显 著 差 异 的 miRNAs； 同时进 一步研究 上游转 录因 子对 miRNA(s)的调 控作用,为 miRNA(s) 在冠心病 发病机 制中 的调控作 用提供 实验 基础 。 方法 : 选择 2012年 9月至 2013年 10月在 宁 波 市 医 疗 中 心 李 惠 利 医 院 心 血 管 内 科 就 诊 患者 ， 冠 心 病 组 为 通 过 冠 状 动 脉 造 影 诊 断 至 少 有 一 条 或 一 条 以 上 的 主 干 冠 状 动 脉狭窄大于 50%或以上的患者 ;正 常 对 照 组 为 通 过 冠 状 动 脉 造 影 诊 断 冠 状 动 脉 未 见狭窄 或 仅 有 心 肌 桥 病 变 的 患 者 。 运用 miRNA基 因 芯 片 技 术 初 步 筛 选 冠 心 病 病 人和正常健康者血浆中的 miRNA 表达谱， 每组 各 3例 样 本 ， 然 后 通过对基因芯 片 结 果 进 行 聚 类 分 析 ， 并 对 冠 心 病 组 中 表达 显 著 升 高 且 差 异 倍数 5倍的 miRNAs 进 一 步 采用 qRT-PCR技 术 进 行 扩 大 样 本 量 (冠 心 病 组 :120例 ,正 常 对 照 组 120例 )验 证，以寻 找在冠 心病 中有显著 差异表 达的 miRNAs。同时, 通 过 生物信息 学软件 I 预测与 冠心 病相关miRNA(s)基因启 动子区 转录因 子结 合位 点 ; 然后进 一步 应 用双萤光 素酶实 验进 行验证其 可靠性 。 结果 : miRNA 基 因 芯 片 初筛结果显示 , 与正常组相比 , 有 4 个 miRNAs （ miR- 206、 miR-302a-3p、 miR-383、 miR-574-5p） 在冠心病组中表达显著升高（ P 值 均0.01)且 表达倍 数 均大于 5 倍。 进一步 运用 qRT-PCR 技术 扩大样本 量进行 验 证结果显示 , miR-206 和 miR-574-5p 在 冠 心 病 组 中 的 表 达 水平 与 正 常 组 相 比 仍 存在显著 差异 (P 值均 0.01); 且 ROC 曲 线表明这 两个 miRNAs 对冠心 病的诊 断 均有较好 的敏感 性和 特异性。 同时 ,生物 信息学软 件预测 hsa-miR-206 启动 子区 有 2 个 转录因子 MyoD 结合位点 ; 进