还原型谷胱甘肽对高糖致大鼠腹膜间皮细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)及其修复酶8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(rOGG1)表达的影响-内科学(肾病)专业论文.docxVIP

贵阳 贵阳医学院硕士研究生学位论文 还原型谷胱甘肽对高糖致大鼠腹膜间皮细胞 8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）及 其修复酶 8-羟基鸟嘌呤-DNA 糖苷酶(rOGG1)表达的影响 专业：内科学（肾病） 研究生：夏璇 导师：甘平 摘 要 目的：本实验通过建立模拟持续性非卧床腹膜透析（CAPD）大鼠模型，观察高糖致 大鼠腹膜间皮细胞8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）表达及其在腹膜慢性炎症发病机制中的可 能作用，探讨高糖所致的腹膜氧化损伤是否与8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶（rOGG1）修复 酶活性下降有关;以及还原型谷胱甘肽对高糖所致的腹膜间皮细胞DNA氧化性损伤的保 护机制。 方法：将 30 只健康雄性 SD 大鼠随机分成 3 组：对照组(n=10，NS)：每天 1 次腹腔 注射生理盐水 25mL；模型组(n=10，HGC)：每天 1 次腹腔注射 4.25%的葡萄糖腹透液 25mL+ 每周 1 次腹腔注射乳糖酸红霉素 6.25 万单位；治疗组（n=10，RG）每天 1 次腹腔注射 4.25%葡萄糖腹透液 25mL +还原型谷胱甘肽（Reduced Glutathione）150mg/kg/d +每周 1 次腹腔注射乳糖酸红霉素 6.25 万单位。8 周后分别处死每组各 10 只大鼠，取腹膜组 织分别行 HE 及 Masson 染色病理检查、酶联免疫吸附法（ELISA）测定壁层腹膜间皮细 胞 8-OHdG 水平、实时荧光定量 PCR（RT-PCR）检测壁层腹膜间皮细胞 rOGG1 的表达。 结果：①与对照组比较，HE 染色时模型组和治疗组可见腹膜间皮细胞变为圆形、柱 形，间皮细胞肥大脱落，间皮下结缔组织明显增厚，可见大量血管生成以及纤维素样物 质沉积，还可见成纤维细胞及单核巨噬细胞浸润，上述现象在模型组表现尤为明显。② 与对照组比较，Masson 染色显示有大量的胶原沉积，模型组比治疗组改变更明显。③与 对照组比较，模型组腹膜间皮细胞 8-OHdG 表达明显上调（P0.05），治疗组低于模型 组（P0.05）；④与对照组比较，治疗组腹膜间皮细胞 rOGG1 表达明显上调（P0.05）， 模型组表达低于治疗组（P0.05）。 结论：①高糖致大鼠腹膜间皮细胞表达氧化性损伤标记物 8-OHdG 明显升高，考虑 8-OHdG 可能与腹膜纤维化的发生有关。②在大鼠无菌性腹膜纤维化模型中，腹膜间皮细 胞纤维化时考虑可能与 DNA 修复酶 OGG1mRNA 表达下调有关。③还原型谷胱甘肽对大鼠 腹膜间皮细胞 DNA 可能具有保护和修复作用。 关键词：高糖;还原型谷胱甘肽;腹膜间皮细胞;腹膜纤维化;8-羟基脱氧鸟苷;8-羟基鸟 嘌呤-DNA 糖苷酶 - I - 贵阳 贵阳医学院硕士研究生学位论文 1 前言 腹膜透析又称为 peritoneal dialysis，简称为腹透或 PD。腹透和血透（HD）目前 是临床上替代治疗终末期肾病患者效果最好的方法，但血透相对于腹透来说，操作相对 复杂，而且需要特殊的医疗设备，并且对于血液动力学不稳定的患者具有一定的局限性， 而且对残肾的保护性不够等缺点，致使腹透在近些年受到越来越多的医护人员及患者的 关注和好评。然而目前腹透在治疗终末期肾病患者的过程中，存在一系列并发症，影响 其疗效，其中最主要的并发症为腹膜纤维化，该并发症是导致患者退出腹膜透析治疗的 最主要原因之一。腹膜组织发生纤维化的主要因素分为感染性和非感染性，前者随着医 疗水平的进步及抗生素的使用，已经得到明显控制，临床发生率逐渐降低，后者是由于 腹透过程中，腹透液对腹膜的长期反复刺激而导致，其病理学改变也与感染性不同，表 现为腹膜层单核巨噬细胞浸润和腹膜细胞外基质的沉积。因此目前临床上迫切需要一种 抗腹膜纤维化有效的药物，来更好的解决的这一问题。同时如何从细胞、分子机制及药 物治疗靶点等方面探寻腹膜纤维化的发生机制，也成为当前研究热点。 当前的研究表明高糖所致腹膜纤维化的可能机制：1、腹膜间皮细胞损伤，2、细胞 外基质沉积，3、腹膜上皮-间质化，研究认为腹膜间皮细胞的氧化损伤是导致上述病理 改变的始动环节之一，但具体机制目前尚未阐明。 机体的氧化损伤普遍存在中，主要表现为生物大分子结构和功能损伤，导致基因发 生突变、细胞出现癌变及个体发生衰老等现象。8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）作为国际上 公认的 DNA 氧化损伤标记物，它是活性氧自由基攻击 DNA 分子中的鸟嘌呤碱基致使其第 8 位碳原子与胸腺嘧啶碱基发生颠倒性互换而产生的一种氧化性加合物。这种互换后的 DNA 氧化损伤产物，可在细胞 DNA 复制过程中 G-T 或 A-C 碱基颠换并出现 DNA 误读，最 终导致细胞损伤发生。8-羟基鸟嘌呤 DNA 糖苷酶简称 OGG1 是体内特异性识别 8-OHD