诺乙龙体内代谢物的GC—MS分析鉴定-药学学报.PDF

药学学报 Actapharmat~UtlCaSinical99l：26 【l0)：777— 78 诺乙龙体内代谢物的GC—MS分析鉴定 刘春胜 张 霁 周 同惠 中国医学科学院药物研究所分析室，北京 lOoo50) 提要 GC—MS联用分析诺乙龙阳性尿 ，检出了诺乙龙经^体吸收代谢以后产生的九个代 谢产物。除Met一2和 Met一7在服药后 84h的屎样 巾仍能被检出以外，诺乙龙原型及其它代 谢物的体内存留时间较短，可检测时蚶不超过 35h。通过解析质谱 ，鉴定 了七个代谢物的分子 结构 ，发现 A环双键还原和 D 环羟基他是诺乙龙的两种体 内代谢途径 。用大孔树脂嗳附提 取、酶解 、衍生化等处理碾样 ，方法回收率达80％ ，诺乙龙的检测 F限为 10ng／ml(10ppb 关键词 诺乙龙 ：代谢物 GC—MS 诺乙龙 (Nilevar或 norethandrolone)是 种蛋白同化激素，临床上利用其蛋 白同化 和雄性化药理作用，治疗贫血 ．大手术后恢复及性功能障碍等病症。由于此类药物能在短 期内增强体能而滥用于体育比赛，属禁用药 一般认为，甾体药物经人体吸收后产生新的代 谢物，有的代谢物以葡萄糖醛酸轭合物在尿中排出。早在 70年代初，C．Cor~ ot“用放 射免疫法 (RL )结合薄层层析 (TLC)，测定了成熟雄性太白鼠血清中的睾丸素(testosterone) 及其主要代谢物的含量 其后气相色谱 (GC)12) 高效液相色谱 (HPLC)…等也曾用于药代 研究。目前高分辨毛细管气相色谱和质谱联用(GC—MS)技术已逐渐成为研究药物代谢的 主要方法 ～”。 本文采用 GC—MS联用法对人尿中诸乙龙及其代谢物进行 了分析鉴定。 实 验 部 分 一 ． 主要仪器及试剂 HP5890GC—HP5970MSD ：HP一5石英毛细管柱 (17m ×0．20mm ×0．33 m)； XAD一2大孔埘脂 (Serva)： 一葡萄糖醛酸甙酶 ：E．cotiIX—A 型 (Sigma)：诺乙龙 (片剂 ，10mg／片，民主德国 Doping Centre提供)：内标物 【5一雄烷 一l7一酮)(加 拿大 INRS—Santb提供) 衍生化试剂 ：MSTFA (N一 甲基 一N一 三 甲基硅基 一 三氟乙酰胺 )(Simg a)和 TMS](三甲基碘硅烷)(Aldrich ChemicalCo．)；TMSI溶液配制 ：430 l二氯甲烷加7O lTM SI，再加 1 1三 乙胺，密闭，避光冷藏 二 ，屎样收集 健康男性服用 25mg诺乙龙，分别收集服药后 0，2，9，17，24，35，48．58，85，107h 尿样，一20℃保存。 奉文于 1990年 7月2扫收到 778 学报 ztaPharmaceulieaSi九i 1991：26I10)：777～ 78 三 ．屎样预处理 按文献 7。 四 ．色谱质谱分析条件 柱温 100℃(Im_I11 三 22O℃— 型 299℃(10Tnjn) 进样 口温度 ：280℃： GC-MSD接 口温度 300c ；无分流进样 I ：载 为 He(流速 1．0ml／min)：离子源 电压 7Oev 结 果 与 讨 论 一 ． 尿中诺 乙龙原型及代谢物质谱鉴定 根据上述分析条件分析诺 乙龙阳性尿 在 9～ 35：l尿样 中检 出了诺 乙龙原型和 9个代谢产物 ，其三 甲基硅烷 衍生物 的色谱分离较好 (图 1)。解析各个组分 的质谱特 征 (图 2)，根据谱 罔显示的 分子量和特征碎片离子 (表 1)推测 ， Met～ 1．2，3分别是诺己龙四氧化 i 代 谢物 的三 个异 构 体：Met一8和 Met～9则是诸乙龙 16一 羟基代谢物 nglG cbruⅫt0胂m 。f TMSd d ∞ 曲 0 ∞ 蛐 0 瑚 砷 。 的一对异构体 经验表明， 体化合物 0枷ⅥndroIo∞