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Sephadex是葡聚糖凝胶,用于分离不同分子量的物质,G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如,G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克,同样G-200克每克千胶吸水20克。不同的型号可以分离不同分子量段的物质,DEAE-Sephadex是阴离子型,Sephadex是阳离子型。 Sephadex LH-20为Sephadex G-25(葡聚糖凝胶按交联度分类的其中一种商品型号)经羟丙基化处理后得到的产物,此时,葡聚糖凝胶分子中的葡萄糖部分将与羟丙基结合成下列醚键形式: -OH → -OCH2CH2CH2OH 与Sephadex G比较,Sephadex LH-20分子中 -OH 基总数虽无改变,但碳原子数所占比例却相对增加了,所以Sephadex LH-20不仅可在水中应用,也可在极性有机溶剂或他们与水组成的混合溶剂中膨润使用。 * * 当物质的分配系数接近时,则需要采用逆流分溶法进行分离。 这种方法是以分配定律为基础的一种新的分离方法,具有很强的分离混合物的能力。 但此方法因仪器易损,操作时间长, 消耗溶剂多等缺点,使用受到限制。 逆流分溶法CCD(counter current distribution) 逆流分溶法采用数百个分离管进行操作,每一次操作后,上层液体被转移至盛有新的下层溶剂的分离管中,而往原分离管中加入新的上层溶剂,看起来好似两相的液体以相反的方向流动,故称为逆流分溶法。 此法又称液滴逆流层析法 原理与逆流分溶相似,但比后者效率高。 液滴逆流分配法DCCC (drop counter current chromatography) 影响液滴逆流分配的主要因素有: 被分离成分在两相溶剂间的分配系数要大; 形成大小合适的移动相液滴,这与两相间的界面张力、密度差、输液管口径和萃取管材料等有关,可以采用数根萃取管预试液滴的形成情况而确定; 液滴间的间隔,与泵的送液速度有关,送液速度过快,液滴间几无间隔变成线流通过固定相,通常也可经过小样探索而定。 液滴逆流分配法的分离效果往往比逆流分溶法好,且不会产生乳化现象。移动相用氮气驱动,被分离物质不会因遇空气中氧而氧化。应用该法曾满意地分离纯化多种成分,如皂苷、生物碱、蛋白质、多肽、氨基酸及糖类等。 吸附规律 极性及其强弱判断 吸附柱色谱 聚酰胺吸附色谱法 大孔树脂 (3) 根据物质的吸附性差别进行分离 极性吸附剂:硅胶、氧化铝 非极性吸附剂:活性炭 吸附规律(P21) 官能团的极性 酸性及碱性化合物 溶剂极性 极性及其强弱判断 硅胶、氧化铝 装柱方法 洗脱溶剂 吸附柱色谱 氢键吸附 吸附规律(P23) 脱鞣质处理 聚酰胺吸附色谱法 吸附性与分子筛原理相结合的分离材料 非极性和极性 应用广泛 大孔吸附树脂 大孔吸附树脂(macroporous absorption resin)属于功能高分子材料,是近30余年来发展起来的一类有机高聚物吸附剂,是吸附树脂的一种,由聚合单体和交联剂、致孔剂、分散剂等添加剂经聚合反应制备而成。 聚合物形成后,致孔剂被除去,在树脂中留下了大大小小、形状各异、互相贯通的孔穴。 因此大孔吸附树脂在干燥状态下其内部具有较高的孔隙率,且孔径较大,在100~1000nm之间,故称为大孔吸附树脂。 大孔吸附树脂 表面积较大,且交换速度较快 机械强度高 抗污染能力强,可重复使用 理化性质稳定,热稳定好 在水溶液和非水溶液中都能使用 大孔吸附树脂优势 凝胶色谱 size exclusion chromatography gel chromatography 葡聚糖凝胶:Sephadex G, Sephadex-LH 20 (4) 根据物质的分子大小差别进行分离 尺寸排阻色谱法 离子交换法分离物质的原理 离子交换树脂的结构与性质 离子交换法的应用 (5)根据解离程度不同进行分离 2.2 色谱分离分析方法 纸色谱法 薄层色谱法 柱色谱法 快速柱色谱法 真空液相色谱法 高效液相色谱法 气相色谱法 快速柱色谱法 P29,图2-9 2.3 结晶和重结晶 结晶的条件 结晶溶剂的选择 制备结晶的方法 不易结晶或非晶体化合物的处理 结晶纯度的判断 2.4 天然产物化学成分的结构鉴定 ----天然产物化学成分经过提取、分离、精制成为单体化合物后,必须进行鉴定,确定其化学结构,才有可能为人工合成、结构改造和药物设计等研究提供可靠的依据。因此,天然产物化学成分的鉴定工作,是本门学科的重要内容之一。 ----在证实所得到的中药化学成分为纯的单体之后,一般要进行熔点、沸点、比旋光度和折光率等物理常数的测定,然后再利用测得的物理常数查对有关文献手册可初步确定样品是已知物还
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