枯草芽孢杆菌习性及其培养.pptxVIP

;主要内容;枯草芽孢杆菌特性;枯草芽孢杆菌：; 菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。;成份含量：;适应生长条件; 将枯草芽孢杆菌在90 ℃水浴中处理10 min后其存活率接近80 %，说明枯草芽孢杆菌具有较好的耐高温性能。; 当培养基初始pH为2和3时，枯草芽孢杆菌培养液OD600值始终约为0.3，当初始pH为4、5、6和7时，在培养12 h后OD600值接近。这说明，枯草芽孢杆菌在强酸性条件下生长性能较差，在弱酸性和中性环境中生长旺盛。; 枯草芽孢杆菌在0.03 %~0.3 %猪胆盐溶液中存活率均超过90 %，这说明，枯草芽孢杆菌对胆盐具有良好的耐受性。 在不同质量浓度猪胆盐液体培养基中，枯草芽孢杆菌均得到了增殖，但增殖幅度不大，说明猪胆盐对枯草芽孢杆菌的增殖具有抑制作用，当猪胆盐质量浓度为0.3 %时，其抑制作用明显增加。;作用机理：; 6.枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。 7.枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其它致病菌生长。 8.刺激动物免疫器官的生长发育，激活T、B淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群体免疫力。 枯草芽孢杆菌不仅在饲料中应该比较广泛，在污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应用也相当广泛，是一种多功能的微生物。 ;应用范围：;菌种培养;制备培养基 称取33g营养琼脂，蒸馏水1000ml，121℃灭菌30min。 分装 按照实验要求，可将配置的培养基分装入试管内或三角瓶中。 液体分装：分装的高度以试管高度的1/4左右为宜；分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶的一半为宜。 固体分装：分装??试管中的应不超过试管的1/5，灭菌后制成斜面；分装三角瓶的量以不超过一半为宜。;加塞 培养基分装完毕后，在试管口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，外边再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称，组别，配制日期。三角瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结扎好，使用时容易解开，同样注明。 ;灭菌 将配置好且包扎完毕的固体、液体培养基及本实验涉及的试管、三角瓶等及400ml纯水于高压灭菌器中以0.14Mpa，121℃条件下高压蒸汽灭菌20分钟。 斜面搁置 将培养基冷却至50℃左右时放置斜面，斜面在试管的1/2处为宜，待斜面凝固后，放置于冰箱中待用。 ;接种 接种到斜面培养基中，标注上日期等信息。放入恒温培养箱中培养作为一级种子。 保藏 斜面置于37℃的培养箱中，培养2—3天，观察菌种长势好坏，若菌种长势好则将其放入冰箱中保藏，若长势不好则需多次斜面转接。 ;无菌操作 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种环和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品，菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的接种必须是无菌操作。 实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。 ; 空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养器皿的时间应尽量短。 用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。 然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。 不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。 ;