第十四章超敏反应性疾病的免疫学检验.pptVIP

超敏反应性疾病的免疫学检验; 超敏反应：已经致敏的机体再次接受相同抗原刺激后，所引起的以生理功能紊乱或组织损伤为主的异常的适应性免疫应答。;第一节 激发试验;激发试验（provocation test） 是模拟自然发病条件，用少量超敏原引起一次较轻的超敏反应发作，达到确定超敏原的一种体内试验。; 非特异性激发：是用组胺等刺激物做雾化吸入， 以观察患者对Ⅰ型超敏反应的敏感性，进而分 析病因或判定疗效。 特异性激发：是用抗原如尘螨等做试验，对明确 超敏原有一定价值。 用于Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应性疾病的检查。;收集原料 粉碎、匀浆 脱脂、提取 过滤、分离 鉴定 分装、保存;皮肤试验的类型与方法;0.01～0.03ml/针;;; 比皮内试验敏感性稍低，但假阳性较少； 皮试液浓度要比皮内试验高10～100倍。;;皮内试验??点刺试验有更好的敏感性;第一次读：48小时打开斑试器,间隔30min待斑试器 压痕消失后判定结果。 第二次读：第3天或第4天。 如怀疑光过敏，在斑贴试验的基础上给予紫外线照 射，操作过程相似。 ;;;;;;;阳性：机体已感染过结核杆菌或BCG接种成功； 强阳性：可能有活动性结核病； 阴性：机体未感染过结核分枝杆菌， 但应考虑： ①感染初期； ②老年人； ③重度结核病患者，机体处于免疫反应低下状态； ④患有其他疾病。;手捏式雾化器;雾化抗原颗粒≤5微米;测基础肺功能 ;;;;;;观察症状;;结果判定及分析 ;结果判定及分析;假性结果 ;第二节 IgE的检测;一、血清总IgE的检测; 临床意义：正常人群血清IgE水平受地域环境、种 族、遗传、年龄、性别、寄生虫感染、测定法及取 样等影响，结果有一定差异。 ;总IgE：正常成人血清含量为 20～200IU/ml 婴儿血中IgE含量极低； 寄生虫感染时可显著增高。 sIgE: ECP(嗜酸性细胞阳离子蛋白）：;放射免疫吸附剂试验 （radioimmunosorbenttest，IRST） 酶联免疫测定法(ELISA) 化学发光 固相荧光免疫分析;临床意义 ： 1、正常人群IgE水平受环境、种族、遗传、年龄、检测方法及取样标准等因素的影响 2、IgE升高相关的常见疾病有：过敏性哮喘、季节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药物性间质性肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某些寄生虫感染等。 ;√ 酶联免疫吸附试验（ELISA）：常用间接法。 √ 免疫印迹技术（IBT）：操作简单，能一次性测定多种变应原的特异性IgE，故临床已普遍采用IBT法。;;特异性变应原加入待检血清;目前公认的检测I型超敏反应方法之一； 具有特异性强、敏感性高； 影响因素少、对患者绝对安全等优点； 过敏性哮喘诊断； 寻找变应原。 缺点：费用昂贵、花费时间长、不同试剂盒的参比血清不同不易相互比较。 ;第三节 免疫复合物检测;抗原特异性循环免疫复合物 利用免疫复合物中抗原特异性来测IC。 优点：特异性高； 缺点：需制备专一的针对抗原的抗体，只能检测特定的一种IC，不常用。（免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂）;抗原非特异性免疫复合物检测 ;CIC：分子量600kDa以上，沉降系数＞19S； 热聚合人IgG(heat agglutination human IgG, HAHG)：作为参考标准品，绘制标准曲线进行CIC定量或测定A值代表CIC相当于HAHG的含量。;一、抗原非特异性CIC检测技术;一、抗原非特异性CIC检测技术; 3.注意事项： ①2%PEG沉淀大分子CIC； ②4%PEG沉淀较小分子CIC； ③超过5%PEG选择性沉淀CIC的特性消失； ④温度影响极大，需进行温差校正； ⑤低密度脂蛋白使浊度增加，空腹采血； ⑥高γ球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加。;一、抗原非特异性CIC检测技术;一、抗原非特异性CIC检测技术;一、抗原非特异性CIC检测技术; 2.技术要点 将一定量待检血清、HAHG和Raji细胞混合，使补体、CIC或HAHG与Raji细胞形成复合物，加入抗人IgG·FIC，形成Raji细胞—补体—CIC(或 HAHG)—抗人IgG· FIC复合物，检测荧光强度。; 3.影响因素 ①培养条件能改变Raji细胞其表面受体的数量及亲和性，影响检测敏感性; ②待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体，能和Raji细胞反应; ③SLE血清中的抗DNA也能和Raji细胞反应，使测定结果偏高。 ; 4.方法评